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EPI400 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

简要说明：

EPI400菌株来源于 EC100菌株，将 EC100 核基因中控制质粒拷贝数的 pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的 pcnB基因，即是EPI400 菌株。 EPI400 菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA 或毒性基因的克隆，在加入诱导剂Copy Cutter InductionSolution后又可以提高质粒产量到正常状态。 [mcrA, Δ(mrrhsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突变有利于插入DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，tonA 赋予其抗噬菌体T1和 T5的能力，rpsL赋予其LIAN霉素抗性。EPI400感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1. EPI400感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。 

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。 

2. 混入质?；蛄硬锸庇η崛岵僮?。 

3. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。