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S17-1 λpir Chemically Competent Cell

基因型：

RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1,thiE1, hsdR17, creC510

简要说明：

S17-1λpir菌株的染色体中整合了RP4-2质粒，该质?？梢孕旧宓牟糠諨NA在接合菌株之间转移。S17- 1λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA1)，提高了质粒DNA的产量和质量；同时为重组酶缺陷型 (recA1)，减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的 lian霉素抗性。 S17-1λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×108 cfu/μg DN

操作说明：

1. S17-1λpir感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的DNA（质?；蛄硬铮┎⒂檬謆o打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。 

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（12-15 h）。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 

2. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。