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GT115 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

简要说明：

GT115菌株，是专门用来克隆含有发夹结构（Hairpin）或重复序列等DNA二级结构的基因序列的大肠杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种SbcCD蛋白复合体，可以识别DNA发夹结构，并将其切除；将sbcC和sbcD两个基因突变，增强了发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表达 兀 蛋白，含有R6Kgori复制子的质粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常复制。rpsL赋予GT115lian霉素抗性，同时该菌株还含有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变，增强了外源DNA的稳定性。GT115感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物） 并用手bo打 EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25 分钟。

2. 42℃水浴热激 45秒，迅速放回冰上并静置 2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌SOC 或LB培养基，混匀后 37℃，200 rpm复苏 60分钟。 

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取 100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 SOC 或 LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养 6.5 小时以上

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8 分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的 DNA 时应轻柔操作。 

3. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。