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基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR)endA1 nupG

简要说明：

TOP-10菌株来源于MC1061菌株， 是目前实验室常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似（DH10B为galE15型，而TOP-10为galU型）。 TOP-10生长速度快（比DH5α快，但比Mach1-T1生长速度慢），10小时可见克隆， recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取?？捎糜诠菇寺?，蓝白斑筛选等实验。 High5TM系列TOP-10感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。

操作说明：

1. TOP-10感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目 的DNA（质粒或连接产物）并用手打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。冰上放置大约5分钟即可融化，融化后8分钟内加入质粒，否则会影响转化效率。

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

 3.转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。