&使用方法

溶液配制

母液制備：

用DMSO溶解粉末，配成5 mg/ml儲(chǔ)存液（如5 mg粉末+1 ml DMSO），分裝避光保存于-20°C。

工作濃度：

根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整，常用終濃度為5–20 μg/ml 。

2. 染色步驟（以細(xì)菌染色為例）

樣品處理：

取1 ml細(xì)菌懸液（密度5×10? cells/ml）置于離心管。

加入20 μl儲(chǔ)存液（終濃度≈100 μg/ml），混勻。

孵育條件：

室溫避光孵育15分鐘。

清洗：

冰DPBS清洗2次（4°C, 3,000 rpm, 10 min）。

檢測：

流式細(xì)胞儀：FL2通道（Ex/Em=488/575 nm）。

熒光顯微鏡：使用518 nm激發(fā)光，收集600 nm發(fā)射信號(hào)。

3. 注意事項(xiàng)

避光操作：全程避光防止熒光淬滅。

防護(hù)措施：穿戴實(shí)驗(yàn)服及手套，避免直接接觸（潛在遺傳毒性類比溴化乙錠）。

對(duì)照設(shè)置：需設(shè)空白對(duì)照（未染色樣品）及單染對(duì)照。

試劑信息

英文名稱：Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)

CAS NO：211566-66-4

分子式：C25H28IN3

分子量：497.41

狀態(tài)：固體

Ex/Em：~518/600nm（與DNA結(jié)合）

溶解性：溶于DMSO

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

&Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)作用機(jī)制

1.核酸結(jié)合機(jī)制

碘化乙啶通過嵌入DNA雙螺旋堿基對(duì)發(fā)揮作用：

其平面菲啶鎓環(huán)插入DNA堿基對(duì)之間，與核酸形成非共價(jià)結(jié)合。

結(jié)合后染料構(gòu)象固定，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（游離狀態(tài)熒光極弱）。

2. 細(xì)胞通透性與選擇性染色

細(xì)胞膜通透性：

具中等親脂性，可自由穿透哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜及革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁。

選擇性染色機(jī)制：

在含革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌）的環(huán)境中，優(yōu)先染色革蘭氏陽性菌。

可能機(jī)制：革蘭氏陰性菌外膜脂多糖（LPS）阻礙染料進(jìn)入，而革蘭氏陽性菌肽聚糖層允許通透。

3. 亞細(xì)胞定位

染色真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，可能涉及線粒體及核仁。

局限性：因可能污染其他亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)），不建議作為特異性核染色劑。

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