【參數(shù)信息】

英文名稱：Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit

中文名稱：螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

CAS NO：61970-00-1

分子量：約61kDa

狀態(tài)：白色粉末

熱穩(wěn)定性：高溫下發(fā)光波長(zhǎng)紅移，酶活性在常溫（20–25°C）穩(wěn)定

溶解性： 需用高鹽緩沖液（如1 M Tris，pH 7–8）復(fù)溶

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

螢火蟲螢光素酶普遍用作一種報(bào)告基因來研究基因調(diào)控和功能，以及用于藥物篩選。由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織缺乏任何內(nèi)源性的熒光素酶活性和生物發(fā)光的天然屬性，螢火蟲熒光素酶是一種非常靈敏的遺傳報(bào)告子。

螢火蟲螢光素酶是一種分子量~61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素（Luciferin）氧化成氧化熒光素，在此氧化過程中釋放出生物螢光。這一熒光可通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。

Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit，正是利用螢光素為底物來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)螢火蟲螢光素酶活性的試劑盒，操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏且呈良好的線性關(guān)系。

優(yōu)勢(shì)

裂解能力強(qiáng)：能夠裂解絕大部分種類細(xì)胞。

信號(hào)更強(qiáng)：能夠精準(zhǔn)檢測(cè)弱啟動(dòng)子的表達(dá)。

靈敏度更高：可檢測(cè)低至數(shù)百個(gè)細(xì)胞樣本。

線性范圍廣：線性檢測(cè)范圍超過酶濃度的8個(gè)數(shù)量級(jí)。

【作用機(jī)制：生物發(fā)光反應(yīng)與基因表達(dá)檢測(cè)】

熒光素酶催化的生化反應(yīng)是試劑盒的核心機(jī)制，分為以下兩步：

酶促發(fā)光反應(yīng)：

在 Mg2+、ATP、O2 存在下，熒光素酶（分子量61 kDa）催化底物 D-熒光素 氧化脫羧，生成 氧化熒光素，并釋放波長(zhǎng) 560 nm 的黃綠色光。

基因表達(dá)關(guān)聯(lián)性：

將目標(biāo)基因的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子或 3'-UTR 等調(diào)控序列克隆至熒光素酶基因上游/下游，構(gòu)建報(bào)告基因質(zhì)粒。

轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄活性直接驅(qū)動(dòng)熒光素酶表達(dá)，酶活性強(qiáng)度與基因表達(dá)水平正相關(guān)。

通過測(cè)量發(fā)光值，可量化藥物處理、信號(hào)通路激活等對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的影響。

雙報(bào)告系統(tǒng)的協(xié)同作用：

為排除轉(zhuǎn)染效率差異的干擾，試劑盒常整合 海腎熒光素酶（Renilla luciferase） 作為內(nèi)參：

螢火蟲熒光素酶檢測(cè)目標(biāo)基因活性，海腎熒光素酶（底物為腔腸素）提供基線校正。

加入抑制劑淬滅螢火蟲信號(hào)后，再檢測(cè)海腎信號(hào)，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

【相關(guān)試劑】

DiOC18(3), 34215-57-1

CDCFDA,SE活細(xì)胞示蹤探針

Alexa Fluor 405-Streptavidin

Alexa Fluor 647-Streptavidin

Alexa Fluor 680-Streptavidin

2-NBDG葡萄糖攝取熒光探針

D-Luciferin,Sodium Salt

Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit

螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit

海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

CAY10731(H2S Probe)硫化氫熒光探針 2119597-33-8

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。