【參數(shù)信息】

英文名稱(chēng)：Fura-2，AM，CellPermeant熒光鈣探針

中文名稱(chēng)：熒光鈣探針 Fura 2-AM

CAS NO：108964-32-5

分子式：C44H47N3O24

分子量：1001.85

狀態(tài)：黃色粉末

Ex/Em：505/336nm

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠(chǎng)商：西安強(qiáng)化生物科技

【Fura-2，AM，CellPermeant熒光鈣探針作用機(jī)制：細(xì)胞滲透性與鈣檢測(cè)原理】

1. 細(xì)胞滲透機(jī)制（Cell Permeant特性）

AM酯化修飾的作用：

Fura-2本身因含多個(gè)羧基而帶負(fù)電荷，無(wú)法穿透細(xì)胞膜。AM基團(tuán)通過(guò)酯化中和電荷，使其成為 脂溶性中性分子，可被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞。

細(xì)胞內(nèi)激活：

進(jìn)入細(xì)胞后，胞內(nèi)酯酶水解AM酯基，釋放游離Fura-2、甲醛和醋酸離子。Fura-2因重新帶電荷而被滯留在胞內(nèi)。

2. 鈣離子檢測(cè)原理

比率法（Ratiometric）檢測(cè)：

Fura-2與Ca2+結(jié)合后，激發(fā)光譜發(fā)生位移：

結(jié)合Ca2+時(shí)，激發(fā)波長(zhǎng)移至 340 nm；

未結(jié)合時(shí)，激發(fā)波長(zhǎng)為 380 nm。

通過(guò)計(jì)算 340 nm/380 nm激發(fā)下的熒光強(qiáng)度比值，可定量鈣離子濃度，此法可消除細(xì)胞厚度、探針濃度等干擾。

熒光變化機(jī)制：

Ca2+與Fura-2的羧基和氮原子形成配位鍵，改變分子內(nèi)共軛結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致激發(fā)光譜紅移。游離Fura-2熒光微弱，結(jié)合Ca2+后熒光增強(qiáng)30倍以上。

3. 選擇性?xún)?yōu)勢(shì)

對(duì)Ca2+的親和力（Kd ≈ 224 nM）高于Mg2+等其他二價(jià)離子，減少交叉反應(yīng)。

比前代探針Quin-2亮度提高30倍，光穩(wěn)定性較強(qiáng)。

【實(shí)驗(yàn)操作流程】

1. 探針加載步驟

儲(chǔ)存液配制：無(wú)水DMSO溶解Fura-2 AM至1-5 mM（如：50 μg粉末+12.5 μL DMSO→4 mM）。

工作液制備：用含鈣鎂的HBSS或HEPES-BSA緩沖液稀釋至0.5-5 μM。關(guān)鍵提示：

添加0.02% Pluronic F-127增強(qiáng)水溶性。

避免血清（含酯酶），防止胞外水解。

細(xì)胞孵育：

移除培養(yǎng)液，HBSS洗滌細(xì)胞3次。

加入工作液覆蓋細(xì)胞，37℃避光孵育15-60分鐘（依細(xì)胞類(lèi)型調(diào)整）。

水解與洗滌：移除探針液，HBSS洗滌3次，再孵育20-30分鐘確保水解。

【相關(guān)試劑】

DiOC5(3)

HumanDiO-Ac-LDL

70363-83-6 DiBAC4(3）

Alexa Fluor 647-Streptavidin

Alexa Fluor 680-Streptavidin

2-NBDG葡萄糖攝取熒光探針

CDCFDA,SE活細(xì)胞示蹤探針

Propidium Monoazide(PMA)

LysoTracker Green DND-26綠色

EnhancedGreen Fluorescent Protein

Enhanced Potassium Green-4 TMA+ Salt

LysoTrackerTMDeep Red深紅溶酶體熒光探針

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。