采用艾德曼降解法的N端測(cè)序：優(yōu)勢(shì)、局限與改進(jìn)措施檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Nduāncèxù是dànbáizhì組學(xué)研究的技術(shù)之一，其中艾德曼降解法（Edman Degradation）長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為是測(cè)定蛋白或多肽N端序列的經(jīng)典方法。該方法基于苯硫酰異氰酸酯（PITC）對(duì)N端氨基酸的選擇性標(biāo)記，并通過(guò)逐步降解實(shí)現(xiàn)氨基酸序列的解析。盡管近年來(lái)基于質(zhì)譜的測(cè)序技術(shù)迅速發(fā)展，但艾德曼降解法仍在某些特定情況下具有優(yōu)勢(shì)，并且通過(guò)改進(jìn)策略可以進(jìn)一步提升其適用性。

一、艾德曼降解法的Nduāncèxù的優(yōu)勢(shì)

1、序列解析的直接性

艾德曼降解法可直接從N端順序解析氨基酸殘基，無(wú)需依賴數(shù)據(jù)庫(kù)匹配。這對(duì)于研究未知蛋白或非模式生物的dànbáizhì序列尤其有價(jià)值。

2、氨基酸定量能力

該方法能夠jīngquè測(cè)定N端氨基酸殘基的含量，使其在dànbáizhì修飾（如乙酰化、甲?；┗蛲吹鞍阻b定中具有應(yīng)用。

3、適用于小分子量蛋白和多肽

艾德曼降解法特別適用于測(cè)定小于50個(gè)氨基酸的小分子蛋白或肽段，在抗體表位映射、短肽鑒定等領(lǐng)域仍被廣泛應(yīng)用。

4、避免質(zhì)譜數(shù)據(jù)復(fù)雜性

質(zhì)譜分析常會(huì)因離子碎裂模式、翻譯后修飾及樣本復(fù)雜度帶來(lái)數(shù)據(jù)解讀的挑戰(zhàn)，而艾德曼降解法能夠直接讀取N端氨基酸序列，減少數(shù)據(jù)分析難度。

二、艾德曼降解法的Nduāncèxù的局限性

1、對(duì)N端封閉蛋白無(wú)效

許多蛋白在翻譯后會(huì)經(jīng)歷N端修飾（如乙?；?、甲酰化或蛋白酶加工），導(dǎo)致艾德曼降解無(wú)法識(shí)別被修飾的N端殘基。

2、測(cè)序長(zhǎng)度有限

由于循環(huán)降解過(guò)程中氨基酸逐步釋放，每個(gè)降解周期都會(huì)帶來(lái)?yè)p耗，使得艾德曼降解法通常只能解析10-50個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的序列，難以處理長(zhǎng)肽或完整蛋白。

3、對(duì)蛋白量要求高

艾德曼降解法對(duì)起始蛋白樣本量有較高需求，通常需要pmol級(jí)別的蛋白，限制了其在超低豐度蛋白中的應(yīng)用。

4、時(shí)間和成本較高

相較于高通量質(zhì)譜技術(shù)，艾德曼降解法需要較長(zhǎng)時(shí)間完成循環(huán)降解，同時(shí)試劑成本較高，限制了其大規(guī)模應(yīng)用。

三、改進(jìn)措施與優(yōu)化策略

1、前處理優(yōu)化以減少N端封閉影響

針對(duì)N端修飾問(wèn)題，可采用化學(xué)或酶促方法解除N端封閉。例如，堿性水解可部分去除N端乙?；?，而使用yídànbáiméi或AspN等酶特異性剪切蛋白，則可在非N端位置形成新N端，從而提高Nduāncèxù成功率。

2、微量樣品的增強(qiáng)策略

通過(guò)改進(jìn)熒光或放射性標(biāo)記技術(shù)，提高檢測(cè)靈敏度，使得納摩爾甚至飛摩爾級(jí)別的樣本亦可用于艾德曼降解分析。此外，高效樣品固定基質(zhì)（如PVDF膜）有助于減少樣品損耗，提高測(cè)序成功率。

3、結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)提高解析能力

艾德曼降解法與質(zhì)譜聯(lián)用（如Edman-MS）可以結(jié)合兩者的優(yōu)勢(shì)進(jìn)行Nduāncèxù，前者用于解析N端序列，后者用于完整蛋白序列的覆蓋補(bǔ)充。例如，先通過(guò)艾德曼降解獲得N端部分序列，再利用質(zhì)譜進(jìn)行深度解析，從而提高蛋白鑒定的準(zhǔn)確性。

4、自動(dòng)化與高通量化發(fā)展

近年來(lái)，自動(dòng)化艾德曼降解系統(tǒng)（如Procise或 PPSQ 系列）已提高了該方法的效率和可重復(fù)性。此外，通過(guò)微流控技術(shù)優(yōu)化反應(yīng)體系，可進(jìn)一步縮短反應(yīng)時(shí)間，并減少試劑消耗，為高通量蛋白組學(xué)研究提供新思路。

艾德曼降解法作為傳統(tǒng)的Nduāncèxù方法，在特定研究場(chǎng)景下仍具有bùkětìdài的優(yōu)勢(shì)。盡管其局限性較為明顯，但通過(guò)優(yōu)化樣品前處理、增強(qiáng)微量檢測(cè)能力、結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)及實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化改進(jìn)，該方法仍能在現(xiàn)代dànbáizhì組學(xué)研究中發(fā)揮作用。百泰派克生物科技提供優(yōu)質(zhì)的基于Edman降解的蛋白N端序列分析服務(wù)，歡迎聯(lián)系我們！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

采用艾德曼降解法的N端測(cè)序：優(yōu)勢(shì)、局限與改進(jìn)措施檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹