支原体肉汤培养基的实验方法与操作步骤！

支原体肉汤培养基的实验方法与操作步骤！

一、基本信息

平台编号：bio-55787

规格：250g

英文名称：Mycoplasma Broth Medium

名称：支原体肉汤培养基

用途：用于培养支原体的基础培养基

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、成分（g/L）

猪胃消化物 10.0

牛肉浸粉 5.0

酵母浸粉 5.0

氯化钠 2.5

葡萄糖 5.0

酚红 0.02

pH值7.6±0.2 25℃

三、用法

称取本品 27.52g,加热溶解于 800ml  蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至室温,无菌操作加入 灭活小牛血清或马血清 200ml 和 80 万单位,混匀,分装无菌试管,备用。

四、操作步骤

1、准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

2、校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。

3、过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

4、分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

5、灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。

五、实验方法

1、产品名称培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。

2、培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。

3、接种量计数：步骤1中的平皿中，细菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，霉菌和白色念珠菌倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。

4、培养条件：

无菌检查：20～25℃培养14天或直至出现浑浊（不超过14天）

MPN计数：30～35℃培养箱中培养3天

控制菌检查：30～35℃培养箱中培养18～24小时

倾注计数用的的胰酪大豆胨琼脂培养基平板置30～35℃培养箱中培养3天

倾注计数用的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20～25℃培养箱中培养3～5天

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