細胞簡介

平臺編號：Bio-129650

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞信息：HLECs

細胞名稱：人淋巴管表皮細胞HLECs

產品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研3類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：人淋巴管表皮細胞HLECs取自女性供體，貼壁培養(yǎng)

注釋：倍增時間45h

特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。

用途：細胞系

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需復蘇的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化。

2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ，移液槍吸出細胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上培養(yǎng)基并混勻 。

3、操作離心 ，調至 1000 轉/分 ，時長 10 分鐘

4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細胞沉淀 ，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 培養(yǎng)基 ，計數(shù) ，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶 ，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6、注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中

細胞傳代操作說明（貼壁細胞）

實驗儀器 ：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、細胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達到 80% ，可進行傳代。

2、按 T25 培養(yǎng)瓶計 ，吸出培養(yǎng)基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具體時間視細胞而定），后用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。 1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細胞，鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。

細胞傳代操作說明（懸浮細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、細胞于培養(yǎng)箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。

2、按 T25 培養(yǎng)瓶計，吹打均勻，吸出培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細胞，鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。

細胞凍存操作說明

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO

實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需凍存的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管 ，凍存管 ，記號筆

實驗步驟：

1、取待凍存的細胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞 ，則可直接離心收集細胞。

2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。

3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。

4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉放-20℃ 1.5～2 h ，再轉人-70℃ 4-12 h 后即可轉移到液氮內(- 196℃)

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