雖然液相蛋白定量檢測(cè)的技術(shù)很多,但是大多數(shù)的技術(shù)僅能對(duì)樣本進(jìn)行單一指標(biāo)的檢測(cè),同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)時(shí)則需要提供大量的樣本分批檢測(cè),操作繁瑣,且各指標(biāo)間差異性較大。對(duì)于樣本量較少或需要對(duì)比各指標(biāo)的用戶(hù),傳統(tǒng)的技術(shù)無(wú)法滿(mǎn)足需要。再者日常實(shí)驗(yàn)中,常需對(duì)溶液體系中的可溶性蛋白進(jìn)行定量檢測(cè),如細(xì)胞培養(yǎng)上清或血清中的細(xì)胞因子含量的定量分析,由于這些因子的含量較少,低于一般常規(guī)方法的檢測(cè)下限,使用常規(guī)的蛋白檢測(cè)方法Western Blot等很難檢測(cè)。愛(ài)必信提供CBA法多因子檢測(cè)試劑盒,提供了更加靈活、簡(jiǎn)便、高效的微量樣本多重檢測(cè)方案。
原理:
將特定的抗體偶聯(lián)到特定的具有不同熒光強(qiáng)度的微球表面,制備成為待測(cè)因子的捕獲微球(Capture Antibody)。將捕獲微球與待測(cè)樣本(血清、血漿或者細(xì)胞培養(yǎng)液)進(jìn)行孵育,此時(shí)待測(cè)的細(xì)胞因子被特定的微球捕獲。生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成抗體包被微球-細(xì)胞因子-檢測(cè)抗體的免疫復(fù)合物,加入藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素與生物素結(jié)合,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè),獲得待測(cè)物的熒光強(qiáng)度,熒光強(qiáng)度與樣本中因子的含量成正比,最后結(jié)合這十二種細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)同一份樣本中多個(gè)因子的定量檢測(cè),輔助判斷機(jī)體的免疫功能狀態(tài)。
不同指標(biāo)檢測(cè)靈敏度:
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注:若檢測(cè)結(jié)果超出檢測(cè)范圍,應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品/樣品/微球稀釋液將樣本稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)重新檢測(cè);若待測(cè)樣本的檢測(cè)結(jié)果低于檢測(cè)下限或未檢測(cè)到,建議直接報(bào)告為≤檢測(cè)值。
模版建立方法:
1、微球群分布:
特異性 | 微球位置 | 微球所屬區(qū)域 |
human TNF-α | L1 | R1 |
human IFN-γ | L2 | R1 |
human IL-2 | L3 | R1 |
human IL-4 | L4 | R1 |
human IL-6 | L5 | R1 |
human IL-10 | L6 | R2 |
human IL-12P70 | L7 | R2 |
human IL-1β | L8 | R2 |
human IL-8 | L9 | R2 |
human IL-17 | L10 | R2 |
human IFN-α | L11 | R3 |
human IL-5 | L12 | R3 |
注:微球內(nèi)部用不同強(qiáng)度的熒光染料染色。
2、模板建立:模板建立可參考:
(1)建立X軸為FSC-H,Y軸為FSC-A的密度圖模板,設(shè)定門(mén),不包含碎片和黏連的微球,如下圖1,P6;
(2)建立X軸為FSC-H、Y軸為SSC-H的線性密度圖模板,設(shè)定混合微球位置R1,R2,R3,如下圖2;
(3)建議兩個(gè)PE(X軸)和APC(Y軸)的對(duì)數(shù)密度圖模板,分別顯示R1門(mén),R2門(mén),R3門(mén)內(nèi)微球,使得微球群能夠清楚和明顯的分布于散點(diǎn)圖上,顯示各因子PE熒光強(qiáng)度。如圖3,圖4,圖5。
3、樣品的檢測(cè)結(jié)果分析
各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本依次上機(jī)檢測(cè),對(duì)于每種微球群,應(yīng)最少獲取100個(gè)微球。利用標(biāo)準(zhǔn)品梯度作標(biāo)曲,計(jì)算樣本檢測(cè)結(jié)果。
CBA應(yīng)用領(lǐng)域:
炎癥因子的水平的分析
腫瘤研究及腫瘤疾病的輔助診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測(cè)
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控
干細(xì)胞研究和干細(xì)胞治療監(jiān)測(cè)
免疫學(xué)研究和免疫疾病的輔助診斷和監(jiān)控
感染疾病的研究及輔助診斷和療效評(píng)價(jià)
免疫功能監(jiān)測(cè)
藥效評(píng)價(jià),藥物研發(fā)、疫苗研究
CBA與傳統(tǒng)的蛋白定量相比有以下優(yōu)勢(shì):
1、微量檢測(cè): 一個(gè)樣本同時(shí)檢測(cè)多個(gè)因子,只需25ul。
2、數(shù)據(jù)更可靠: 多指標(biāo)來(lái)源于同一樣本
3、檢測(cè)速度快:多因子同時(shí)檢測(cè),無(wú)需過(guò)夜孵育。
4、靈敏度高:低至1.22pg/mL。
Absin CBA盒子優(yōu)點(diǎn):
1、性能好:采用Biotin-SAV信號(hào)放大系統(tǒng),靈敏度更高。
2、磁性微球: 搭配磁標(biāo)板,操作簡(jiǎn)單。
3、適用廣:與多種流式細(xì)胞儀兼容。
4、易分析:免費(fèi)提供FCAP v3.0分析軟件。
5、指標(biāo)靈活:檢測(cè)指標(biāo)可靈活組合。
可自由組合的多因子檢測(cè)Kit:
Absin現(xiàn)有Kit
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
abs50187 | 小鼠十一項(xiàng)細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒(流式熒光發(fā)光法) | 48T/96T |
abs50186 | 人十二項(xiàng)細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒(流式熒光發(fā)光法) | 48T/96T |
配套耗材
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
abs7985 | 96孔磁標(biāo)板 | 1個(gè) |
在試劑盒現(xiàn)有指標(biāo)的基礎(chǔ)上,可以選擇個(gè)別指標(biāo)進(jìn)行組合,形成更少指標(biāo)的盒子(比如四項(xiàng)或者五項(xiàng)細(xì)胞因子)但是human和mouse指標(biāo)不通用。可聯(lián)系業(yè)務(wù)人員咨詢(xún)組合Kit價(jià)格和貨期。
Human指標(biāo) | Mouse指標(biāo) |
human TNF-α | mouse TNF-α |
human IFN-γ | mouse IFN-r |
human IL-4 | mouse IL-4 |
human IL-6 | mouse IL-6 |
human IL-5 | mouse IL-5 |
human IL-10 | mouse IL-10 |
human IL-12P70 | mouse IL-12P70 |
human IL-1β | mouse IL-1β |
human IL-17 | mouse IL-17A |
human IL-2 | mouse MCP-1 |
human IL-8 | mouse GM-CSF |
human IFN-α |
Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)!
Absin產(chǎn)品線:
爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè));細(xì)胞培養(yǎng)(類(lèi)器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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