一、核心定義與技術(shù)原理

KO first（又稱Conditional Ready）是一種多用途基因敲除模型，通過雙重組系統(tǒng)（Cre/loxP + Flp/FRT）實(shí)現(xiàn)基因功能的靈活調(diào)控。其核心目標(biāo)是為同一基因提供兩種研究路徑：

1. 全身性敲除（KO） ：yong久性失活靶基因，同時(shí)啟動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)。

2. 條件性敲除（cKO）轉(zhuǎn)換：通過重組獲得Flox小鼠，用于組織特異性基因敲除。

分子結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

二、構(gòu)建流程與遺傳操作

步驟1：初始模型制備

通過CRISPR/Cas9技術(shù)將上述結(jié)構(gòu)插入小鼠基因組，獲得floxed報(bào)告基因小鼠（即KO first基礎(chǔ)品系）。

步驟2：雙路徑分化

關(guān)鍵操作說明：

• Cre介導(dǎo)重組：切除Neo基因及floxed區(qū)域，使報(bào)告基因受內(nèi)源啟動(dòng)子調(diào)控（用于基因表達(dá)定位）。

• Flp介導(dǎo)重組：移除SA-IRES-reporter盒，保留兩側(cè)loxP位點(diǎn)，生成傳統(tǒng)Flox小鼠。

案例：胚胎凍存品系構(gòu)建

• Fbn1-KO：敲除exon 65-66的凍存品系，需避免胚胎致死。

• Prps1-KO：敲除exon 2的C57BL/6Smoc品系。

三、核心應(yīng)用場景

1. 基因功能全景研究

2. 疾病機(jī)制與治療評(píng)估

• 免疫介導(dǎo)疾病：

• α-Gal KO小鼠評(píng)估xin臟瓣膜鈣化，抗Gal抗體滴度提升2倍，鈣沉積量增加4倍。

• 神經(jīng)系統(tǒng)疾病：

• Cnr1-KO用于抑郁癥及癲癇研究。

3. 藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證

• 多基因協(xié)同調(diào)控：通過Flp/Cre系統(tǒng)構(gòu)建多基因cKO，模擬復(fù)雜疾?。ㄈ缒[瘤微環(huán)境）