一、基因編輯技術(shù)發(fā)展脈絡(luò)與核心突破

1. 核酸酶技術(shù)的迭代演進(jìn)

CRISPR核心優(yōu)化：

• 特異性提升：雙切口酶（Cas9n）設(shè)計(jì)減少脫靶效應(yīng)（Ran et al. 2013）

• 遞送革新：病毒樣顆粒（VLP）遞送CRISPR-RNP，避免DNA整合風(fēng)險(xiǎn)（TT2025會(huì)議O-2）

2. 第三代編輯工具：引導(dǎo)編輯（Prime Editing）

• 技術(shù)原理：融合逆轉(zhuǎn)錄酶與nCas9，通過pegRNA直接寫入新序列（許志錳等 2024）

• 小鼠模型應(yīng)用：

• 精準(zhǔn)疾病模型構(gòu)建：成功引入人類并指畸形突變（Liu et al.）

• 遺傳病修復(fù)：lao氨酸血癥、先天性黑蒙癥等模型基因校正（Jang et al.）

二、小鼠基因編輯的核心策略與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1. 胚胎水平編輯

2. 體細(xì)胞與干細(xì)胞編輯

• 類器官模型：肝/腸類器官中模擬遺傳病

• iPSC聯(lián)合編輯：CRISPR校正ALS突變（SOD1 R115G）后移植

3. 時(shí)空特異性編輯系統(tǒng)

• 化學(xué)誘導(dǎo)二聚化（CID） ：控制Cre重組酶活性（TT2025 O-4）

• 光控CRISPR：光敏蛋白融合Cas9實(shí)現(xiàn)神經(jīng)環(huán)路精準(zhǔn)編輯

三、疾病模型構(gòu)建的突破性應(yīng)用

1. 傳染病與免疫研究

• 免疫檢查點(diǎn)人源化：PD-1/CTLA-4人源化小鼠用于腫瘤免yi治療篩選（上海交大講座）

• 病毒受體編輯：ACE2人源化小鼠研究新guan病毒入侵機(jī)制

2. 神經(jīng)退行性疾病

• 神經(jīng)毒性模型：CRISPR引入Tau蛋白突變（P301L）模擬阿爾茨海默病

• 基因治療驗(yàn)證：AAV遞送PE修復(fù)Leber先天性黑蒙癥

3. 代謝與罕見病

• 肥胖/糖尿病模型：瘦素基因（Lep）敲除小鼠（南模生物）

• 大型動(dòng)物模型拓展：引導(dǎo)編輯構(gòu)建犬髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良模型