脂肪酸合成酶（FAS）活性试剂盒说明书

微量法 100T/96S

脂肪酸合成酶FAS活性试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅meiA 和丙二酰辅meiA 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：

FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA 和NADPH 生成长链脂肪酸和NADP⁺；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而NADP⁺没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。

组成：

试剂一：液体 100ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶。临用前加入 440μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 440μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 840μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶液提?。?/span>

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。

细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g， 4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。

血清等液体：直接测定。

FAS 测定操作：

分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。

在 96 孔板或 EP 管中依次加入 20μl 上清液、4μl 试剂二、4μl 试剂三、164μl 试剂四和 8μl 试剂五，混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记录为A1 和A2?！鰽 测=A1-A2。

FAS 活性计算：

使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(Cpr×V 样)÷T

=1608×△A÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷W

按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V 样÷T

=1608×△A

ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体积，200μl=2×10-4L； Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μl=0.02 ml；V样总：提取液体积，1 ml；T：反应时间，1min。

使用 96 孔板测定的计算公式如下

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr×V 样)÷T

=3216×△A÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=3216×△A÷W

按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

=3216×△A÷细胞数量

按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反总×109 )÷V 样÷T

=3216×△A

ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积，

200μl=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μl=0.02 ml；V 样总：提取液体积，1 ml；T：反应时间，1min。

脂肪酸合成酶FAS活性试剂盒