脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

脂蛋白酯酶試劑盒 脂肪酸系列

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

脂蛋白酯酶是脂肪細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞、乳腺細胞及巨噬細胞等實質細胞合成的一種酶，可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯，以供組織氧化供能和貯存，并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。

測定原理：

脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕櫚酸酯產生 4-硝基苯fen，在 400nm 有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。

樣品處理：

組織：按照質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。

細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。

血清：直接測定。

測定操作：

計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下 標準曲線：y= 0.0581x -0.0169，R2=0.9982

按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr

按照樣本質量計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每克組織每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 17.21×（△A+0.0169）÷W

按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每 104 個細胞每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V 反總÷（V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣總）÷T= 17.21×（△A+0.0169）÷細胞數(shù)量

按照液體體積計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫升血清每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/ml）=（△A+0.0169）÷0.0581×V 反總÷V 樣÷T

= 17.21×（△A+0.0169）

V 反總：反應總體積，0.2ml；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質量，g；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min

b．用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.029x -0.0169，R2=0.9982

按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.029×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 34.42×（△A+0.0169）÷Cpr

按照樣本質量計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每克組織每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.029×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 34.42×（△A+0.0169）÷W

按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每 104 個細胞每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V 反總÷（V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

=34.42×（△A+0.0169）÷細胞數(shù)量

按照液體體積計算

酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫升血清每分鐘水解產生 1μmol 4-硝基苯fen為一個酶活力單位。 LPL 活性（μmol /min/ml）=（△A+0.0169）÷0.029×V 反總÷V 樣÷T

= 34.42×（△A+0.0169）

V 反總：反應總體積，0.2ml；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質量，g；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min

注意事項：

試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測定，否則影響吸光值。

吸光值過高或者測定結果不穩(wěn)定，則將酶液進行適當?shù)南♂?，并在計算公式中乘以稀釋倍?shù)。

脂蛋白酯酶試劑盒 脂肪酸系列