乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书

微量法 100T/48S

乳酸含量试剂盒 三羧酸

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理：

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙tong酸，同时使 NAD⁺还原生成NADH 和H⁺，H⁺传递给PMS 生成的PMSH2 还原INT 生成红色物质，在 530nm 处有特征吸收峰。

组成：

试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加入 0.6ml 蒸馏水充分溶解。试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 6ml 蒸馏水充分溶解。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有4 个棕色空瓶）

自备仪器和用品：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。

样本处理：

组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。

细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；于 4℃，12000g离心 10min，取上清测定。

血清：直接测定。

测定操作：

注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管

计算公式：

按照蛋白含量计算

LA 含量（μmol/mg prot）= △A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr

= 2×△A 样÷△A 标÷ Cpr

按照样本质量计算

LA 含量（μmol/g 鲜重）= △A 样÷△A 标×C 标÷ W

= 2×△A 样÷△A 标÷ W

按照细胞数量计算

LA 含量（μmol/10⁴ cell）= △A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量

= 2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量

按照液体体积计算

LA 含量（μmol/ml）= △A 样÷△A 标×C 标

= 2×△A 样÷△A 标

C 标：标准品浓度，2mmol/L；W：样本质量，g/ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml

注意事项：

若吸光值超过 2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

最di检出限为 1.8μmol/L。

乳酸含量试剂盒 三羧酸