NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感受态细胞Rosetta (DE3)

产品货号：C9208

产品名称：Rosetta (DE3) 感受态细胞Rosetta (DE3)

英文名称：Rosetta (DE3)

产品规格：10*100ul /20*100ul

Rosetta (DE3) 感受态细胞 载体构建

产品简介：

外观(性状)：干冰运输，需加干冰费。

储存条件：液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感受态细胞Rosetta (DE3)是采用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107cfu/µg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型: F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr)

特点:该菌株是携带氯mei素抗性质粒BL21的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项：

1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会

降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最di。

Rosetta (DE3) 感受态细胞 载体构建

产品订购信息：

C9208  Rosetta (DE3) 感受态细胞Rosetta (DE3) 10*100ul /20*100ul