Top-Down蛋白質(zhì)測序：優(yōu)勢、應(yīng)用與挑戰(zhàn)檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)不斷向精細(xì)化與功能化拓展的當(dāng)下，如何從整體層面解析dànbáizhì的結(jié)構(gòu)與修飾，成為解析生物功能和疾病機(jī)制的關(guān)鍵。Top-Downdànbáizhì測序作為直接分析完整dànbáizhì分子的技術(shù)路徑，近年來在多種復(fù)雜生物體系中展現(xiàn)出dútè優(yōu)勢，是研究dànbáizhì異構(gòu)體和翻譯后修飾（PTMs）bùkěhuòquē的工具之一。

一、Top-Downdànbáizhì測序技術(shù)概述

Top-Down方法以完整dànbáizhì為起點(diǎn)，跳過酶解步驟，直接通過高分辨質(zhì)譜完成離子化、分離和碎裂，從而獲取序列信息與修飾狀態(tài)。這種策略可實(shí)現(xiàn)對(duì)dànbáizhì原始結(jié)構(gòu)的全面保留，為解析復(fù)雜同種型（Proteoform）和識(shí)別共存修飾提供了必要手段。與基于肽段級(jí)別的測序方式相比，Top-Down避免了修飾信息丟失、位點(diǎn)重定位和同種型混淆等問題，更適用于jīngquè結(jié)構(gòu)解析與功能研究。

二、Top-Downdànbáizhì測序技術(shù)優(yōu)勢解析

1、jīngquè識(shí)別同種型異構(gòu)體

一個(gè)基因可編碼多個(gè)同種型蛋白，其差異可能來自替代剪接、起始位點(diǎn)變異或多種修飾的組合。Top-Down通過直接測序完整蛋白體，實(shí)現(xiàn)對(duì)異構(gòu)體的高分辨識(shí)別與定量，為疾病相關(guān)變異體的發(fā)現(xiàn)提供更高靈敏度的技術(shù)路徑。

2、翻譯后修飾的完整解析

在肽段級(jí)別分析中，翻譯后修飾（如磷酸化、乙酰化、甲基化）易因酶切斷裂位點(diǎn)偏好性而發(fā)生偏差，造成修飾位置的不確定性。Top-Down可在不破壞修飾組合結(jié)構(gòu)的前提下，完整記錄并定位多重修飾，尤其適用于信號(hào)通路中動(dòng)態(tài)修飾的追蹤。

3、高結(jié)構(gòu)保真度支持空間構(gòu)象研究

Top-Down質(zhì)譜可獲得更豐富的片段離子，支持推斷dànbáizhì的二級(jí)和三維結(jié)構(gòu)特征。對(duì)于需要解析構(gòu)象變化或受限空間修飾的研究場景，具備yōuyuè的信息覆蓋能力。

4、一站式定性定量能力

Top-Down技術(shù)不僅可提供dànbáizhì序列與修飾信息，還能在同一實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)定量分析，尤其適用于對(duì)單一目標(biāo)蛋白在不同狀態(tài)下的表達(dá)與修飾比較。

三、Top-Downdànbáizhì測序主要應(yīng)用場景

1、疾病機(jī)制研究與生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)

在腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫等復(fù)雜病理狀態(tài)中，dànbáizhì異構(gòu)體的表達(dá)變化往往早于轉(zhuǎn)錄組水平的改變。Top-Down能夠識(shí)別疾病相關(guān)的特異性Proteoform，為生物標(biāo)志物篩選與jīngzhǔn治療靶點(diǎn)的確立提供數(shù)據(jù)支持。

2、細(xì)胞應(yīng)答與修飾動(dòng)態(tài)調(diào)控分析

細(xì)胞對(duì)刺激或藥物的應(yīng)答常通過PTMs調(diào)控蛋白活性。Top-Down在不丟失共存修飾組合的前提下，捕捉細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)變中的修飾圖譜變化，揭示調(diào)控機(jī)制。

3、生物制品結(jié)構(gòu)驗(yàn)證與質(zhì)量控制

對(duì)于單克隆抗體、融合蛋白等復(fù)雜生物制劑，結(jié)構(gòu)完整性直接影響其活性與穩(wěn)定性。Top-Down能識(shí)別剪切體、去糖化、脫?；任⑿∽儺?，滿足結(jié)構(gòu)一致性審評(píng)標(biāo)準(zhǔn)，已逐步應(yīng)用于生物藥開發(fā)與質(zhì)量評(píng)估環(huán)節(jié)。

四、Top-Downdànbáizhì測序技術(shù)挑戰(zhàn)

1、高分辨儀器要求

完整dànbáizhì分析對(duì)質(zhì)譜分辨率和碎裂效率提出jígāo要求，目前僅部分平臺(tái)具備覆蓋高質(zhì)量碎片信息的能力，尚未形成普及化配置。

2、樣品預(yù)處理復(fù)雜度

完整dànbáizhì在富集與分離過程中易發(fā)生降解與聚集，分析前需優(yōu)化緩沖體系、去鹽策略與分離流程，對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提出更高門檻。

3、數(shù)據(jù)處理算法尚不成熟

Top-Down產(chǎn)生的碎片離子信息龐大且復(fù)雜，對(duì)數(shù)據(jù)庫搜索、修飾位點(diǎn)匹配及異構(gòu)體鑒定算法的依賴程度遠(yuǎn)高于其他方法。數(shù)據(jù)分析工具仍需持續(xù)迭代，才能支撐高通量研究需求。

隨著質(zhì)譜硬件不斷進(jìn)化（如ETD/ECD碎裂技術(shù)提升）、自動(dòng)化樣品制備平臺(tái)落地，以及AI驅(qū)動(dòng)的數(shù)據(jù)解析方法不斷優(yōu)化，Top-Downdànbáizhì測序的通量與穩(wěn)定性正在快速提升。該技術(shù)有望在dànbáizhì功能組學(xué)、疾病機(jī)制解析和生物制品開發(fā)中發(fā)揮更廣泛作用，并與其他組學(xué)手段形成互補(bǔ)協(xié)同，構(gòu)建多維度生物信息解析體系。百泰派克生物科技聚焦前沿dànbáizhì組學(xué)技術(shù)，基于*的質(zhì)譜平臺(tái)，搭建了適用于Top-Down分析的一體化流程。我們提供包括完整蛋白提取、前處理優(yōu)化、分離富集、質(zhì)譜測定及數(shù)據(jù)注釋在內(nèi)的定制化服務(wù)，適用于蛋白異構(gòu)體研究與修飾圖譜繪制。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合*藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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