體外下拉試驗(yàn)檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

體外下拉試驗(yàn)（In vitro pull-down assay）又稱dànbáizhì下拉實(shí)驗(yàn)，主要用于研究dànbáizhì與dànbáizhì、dànbáizhì與核酸或其他生物分子之間的相互作用。在體外下拉試驗(yàn)中，通常將感興趣的dànbáizhì（稱為“誘餌"）固定在固相載體上，如瓊脂糖珠或磁珠，然后將含有可能與誘餌蛋白相互作用的其他dànbáizhì（稱為“靶"）的溶液加入反應(yīng)體系中。通過洗滌和分離，未結(jié)合的dànbáizhì被去除，而結(jié)合的靶蛋白則被“拉下"并固定在固相載體上。后續(xù)通過電泳和質(zhì)譜等分析手段，可以鑒定出與誘餌蛋白相互作用的靶蛋白。體外下拉試驗(yàn)通過模擬細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的生物環(huán)境，幫助科學(xué)家揭示分子間的相互作用機(jī)制，從而為理解生命過程提供信息。體外下拉試驗(yàn)的應(yīng)用非常廣泛。其不僅可用于確認(rèn)已知的dànbáizhì相互作用，還可以用于發(fā)現(xiàn)新的相互作用網(wǎng)絡(luò)。此外，體外下拉試驗(yàn)還可以幫助研究dànbáizhì復(fù)合物的組成，從而揭示復(fù)雜生物功能的分子基礎(chǔ)。例如，在信號傳導(dǎo)研究中，體外下拉試驗(yàn)可用于鑒定參與特定信號通路的組成分子，從而為靶向治療提供線索。

一、體外下拉試驗(yàn)分析步驟

1、準(zhǔn)備：獲取高純度的目標(biāo)蛋白，可通過原核或真核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組表達(dá)、純化；選擇合適的親和標(biāo)簽（常見的有 GST、His 標(biāo)簽等）標(biāo)記目標(biāo)蛋白，準(zhǔn)備對應(yīng)的固相載體；制備細(xì)胞裂解液，其含有豐富的細(xì)胞內(nèi)源性dànbáizhì，作為潛在相互作用蛋白的來源。

2、固定目標(biāo)蛋白：將帶有親和標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白與固相載體孵育，使二者特異性結(jié)合，從而將目標(biāo)蛋白固定在載體表面。例如，GST 融合蛋白與 GST 親和樹脂結(jié)合，形成固定化的 “誘餌"。

3、孵育與結(jié)合：把固定有目標(biāo)蛋白的固相載體放入細(xì)胞裂解液中，在適宜的溫度（常為 4℃）、時長（數(shù)小時至過夜）條件下緩慢搖動孵育，促進(jìn)可能存在的相互作用蛋白與目標(biāo)蛋白結(jié)合。

4、洗滌：孵育結(jié)束后，使用緩沖液多次洗滌固相載體，目的是洗去未與目標(biāo)蛋白結(jié)合的雜蛋白，減少背景干擾，這一步驟對結(jié)果的特異性至關(guān)重要。

5、洗脫：運(yùn)用合適的洗脫試劑（如含游離親和標(biāo)簽的溶液、高鹽緩沖液、改變 pH 的緩沖液等）將結(jié)合在目標(biāo)蛋白上的相互作用蛋白從固相載體上洗脫下來。

6、檢測：采用 Western blot、SDS - PAGE 電泳、質(zhì)譜分析等手段對洗脫下來的蛋白進(jìn)行鑒定和分析。

二、注意事項(xiàng)與常見問題

1、非特異性結(jié)合：為了減少非特異性結(jié)合，通常需要在反應(yīng)體系中加入高鹽、非離子型洗滌劑等，以提高結(jié)合反應(yīng)的特異性。

2、dànbáizhì的穩(wěn)定性：反應(yīng)條件（如pH、溫度）需要優(yōu)化，以保證dànbáizhì的穩(wěn)定性和活性，避免錯誤的相互作用結(jié)果。

3、信號強(qiáng)度：在檢測階段，確保檢測方法的靈敏度足夠高，以便正確識別低豐度的靶蛋白。

三、技術(shù)優(yōu)勢

1、高特異性與靈敏度：通過優(yōu)化反應(yīng)條件和檢測方法，體外下拉試驗(yàn)可以實(shí)現(xiàn)對特定分子間相互作用的高特異性檢測。

2、廣泛的適用性：無論是dànbáizhì、核酸，還是其他生物大分子，體外下拉試驗(yàn)都能適應(yīng)不同的分子類型。

3、實(shí)用性強(qiáng)：實(shí)驗(yàn)操作相對簡單且結(jié)果直觀，適合大規(guī)模篩選和驗(yàn)證。

體外下拉試驗(yàn)憑借其優(yōu)勢，在dànbáizhì組學(xué)、藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)、信號通路解析等眾多生物學(xué)研究領(lǐng)域，都是極為關(guān)鍵的研究手段。采用ISO9001質(zhì)量控制體系，獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，百泰派克生物科技致力于提供zhuānyè的Pull-down靶dànbáizhì譜鑒定服務(wù)，能夠根據(jù)客戶的研究需求設(shè)計和執(zhí)行定制化的實(shí)驗(yàn)方案。無論是基礎(chǔ)研究還是應(yīng)用開發(fā)，我們都致力于為您提供高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)支持，幫助您的研究項(xiàng)目取得成功。歡迎與我們合作。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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