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當(dāng)前位置:北京百泰派克生物科技有限公司>>檢測技術(shù)服務(wù)>>蛋白分析>> 蛋白質(zhì)定量技術(shù):方法、優(yōu)勢與應(yīng)用
產(chǎn)品型號
品 牌百泰派克
廠商性質(zhì)其他
所 在 地北京市
更新時(shí)間:2025-06-04 14:14:05瀏覽次數(shù):73次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)Bottom-Up蛋白質(zhì)組學(xué)在生物標(biāo)志物
Bottom-Up蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)分析流程
糖蛋白組學(xué)在藥物開發(fā)中的應(yīng)用檢測技術(shù)服務(wù)
糖蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析的原理與常用技術(shù)解析
基于標(biāo)記的糖蛋白質(zhì)組學(xué)定量策略全解析
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在現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中,dànbáizhì被視為細(xì)胞功能的直接體現(xiàn)者。無論是探究疾病的分子機(jī)制,還是開發(fā)jīngzhǔn醫(yī)療方案,研究者都必須深入了解dànbáizhì在不同條件下的表達(dá)變化。因此,dànbáizhì定量技術(shù)逐漸成為生命科學(xué)研究中bùkěhuòquē的一環(huán)。
一、dànbáizhì定量的科學(xué)意義
dànbáizhì定量,即對特定生物樣本中目標(biāo)蛋白的豐度進(jìn)行數(shù)值化測量。在生理和病理過程中,蛋白表達(dá)常伴隨著顯著波動,通過定量分析可以反映出基因表達(dá)后的實(shí)際功能狀態(tài)。與轉(zhuǎn)錄組或基因組數(shù)據(jù)相比,dànbáizhì水平的數(shù)據(jù)更加接近表型層面,是連接基因調(diào)控與細(xì)胞功能的關(guān)鍵橋梁。例如,兩個(gè)組織樣本即便在mRNA水平無明顯差異,但在蛋白水平上可能存在顯著表達(dá)失衡,這種“轉(zhuǎn)錄后調(diào)控"現(xiàn)象往往對疾病發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要。
二、dànbáizhì定量方法概覽
當(dāng)前常用的dànbáizhì定量方法主要可分為三大類:基于標(biāo)記的方法、無標(biāo)記方法,以及靶向質(zhì)譜定量方法。不同策略適用于不同的研究目標(biāo)、樣本類型和預(yù)算考量。
1、基于同位素標(biāo)記的方法
??TMT/iTRAQ
TMT(Tandem Mass Tags)和iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification)均屬于同位素標(biāo)簽定量技術(shù),通過將不同樣本中的肽段打上不同的同位素標(biāo)簽,實(shí)現(xiàn)樣本在同一質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)中的并行分析。
優(yōu)勢:
可一次性分析8至16個(gè)樣本,效率高
數(shù)據(jù)一致性強(qiáng),適合處理臨床隊(duì)列
常與高分辨率Orbitrap平臺聯(lián)用,提高定量精度
限制:
存在比值壓縮(ratio compression):共洗脫干擾信號會影響定量準(zhǔn)確性。
成本較高:標(biāo)簽試劑價(jià)格昂貴。
對樣本質(zhì)量和酶解效率要求高,前處理復(fù)雜。
??SILAC
SILAC(Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture)采用體內(nèi)標(biāo)記原理,直接將含13C或15N的氨基酸引入細(xì)胞培養(yǎng)中,生成“輕重肽"差異,適合細(xì)胞系蛋白表達(dá)動態(tài)研究。
優(yōu)勢:
生物學(xué)背景統(tǒng)一,變異少
非侵入性,標(biāo)記效率幾乎100%
適合研究信號通路激活、蛋白互作動態(tài)等
限制:
不適用于組織、體液等非培養(yǎng)類樣本
培養(yǎng)時(shí)間長,且部分細(xì)胞系對標(biāo)記氨基酸適應(yīng)性差。
2、無標(biāo)記定量(Label-Free Quantification, LFQ)
LFQ是目前應(yīng)用zuì廣泛的dànbáizhì定量策略之一。它不需要任何化學(xué)或同位素標(biāo)簽,而是依賴于肽段在質(zhì)譜中的離子強(qiáng)度或譜圖數(shù)進(jìn)行相對定量。
優(yōu)勢:
樣本處理流程簡單,成本低
樣本類型兼容性強(qiáng)(適用于血清、組織、細(xì)胞、外泌體等)
適合開展大規(guī)模樣本探索研究
限制:
定量精度受質(zhì)譜穩(wěn)定性影響大:對LC-MS/MS平臺一致性要求高。
動態(tài)范圍有限:極低豐度蛋白可能被漏檢。
批間差異需嚴(yán)格控制,通常需設(shè)置內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)或偽重抽樣策略以提升可信度。
3、靶向定量
當(dāng)研究進(jìn)入蛋白驗(yàn)證階段,尤其需要高特異性與高重復(fù)性的定量方法時(shí),MRM(Multiple Reaction Monitoring)和PRM(Parallel Reaction Monitoring)成為shǒuxuǎn。
??MRM
MRM常用于蛋白驗(yàn)證與臨床轉(zhuǎn)化研究。其原理是通過選擇性地監(jiān)測特定肽段及其碎片離子的特征對,實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測。
優(yōu)勢:
極低的背景干擾
良好的定量線性范圍
適合juéduì定量,結(jié)合內(nèi)標(biāo)后可提供ng/mL級別的精度
限制:
建立方法復(fù)雜:需針對每個(gè)目標(biāo)肽段進(jìn)行優(yōu)化。
一次性分析蛋白數(shù)量有限:通量受限于質(zhì)譜循環(huán)速度。
不適合探索性研究,僅適用于已知目標(biāo)。
??PRM
PRM利用高分辨質(zhì)譜全面掃描目標(biāo)肽段的所有碎片離子。
優(yōu)勢:
分辨率高,干擾更少。
數(shù)據(jù)更全面,便于后期數(shù)據(jù)驗(yàn)證與復(fù)用。
適合靶標(biāo)驗(yàn)證與轉(zhuǎn)化研究過渡階段。
限制:
對儀器性能要求高:需高分辨率質(zhì)譜支持。
數(shù)據(jù)分析較為復(fù)雜,對信息學(xué)工具依賴程度高。
三、dànbáizhì定量的典型應(yīng)用場景
1、疾病分子機(jī)制研究
通過分析患者與正常對照樣本中的蛋白表達(dá)差異,可揭示疾病關(guān)鍵通路及核心調(diào)控節(jié)點(diǎn)。例如,乳腺癌亞型間蛋白表達(dá)譜存在顯著差異,為jīngzhǔn分型和治療靶點(diǎn)識別提供理論依據(jù)。
2、生物標(biāo)志物篩選與驗(yàn)證
從Discovery階段的大規(guī)模篩選(如LFQ或TMT),到PRM/MRM驗(yàn)證,蛋白定量技術(shù)構(gòu)成了完整的標(biāo)志物研究鏈條,推動基礎(chǔ)成果向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化。
3、藥物作用機(jī)制與療效評估
在藥物研發(fā)中,研究者常利用蛋白定量分析藥物處理前后的蛋白變化,揭示其作用靶點(diǎn)、影響通路,評估療效和毒性。
4、微生態(tài)與免疫互作研究
蛋白定量結(jié)合代謝組與轉(zhuǎn)錄組等技術(shù),能夠系統(tǒng)地剖析宿主-微生物-免疫系統(tǒng)間的相互作用,已廣泛應(yīng)用于腸道疾病、自身免疫病研究中。
從揭示細(xì)胞應(yīng)答機(jī)制,到識別臨床診斷標(biāo)志物,再到推動個(gè)體化治療策略建立,蛋白定量的價(jià)值正日益凸顯。無論是高通量的iTRAQ/TMT、靈活便捷的LFQ,還是jīngquè靶向的MRM/PRM,不同dànbáizhì定量方法在各自應(yīng)用場景中都展現(xiàn)出dútè優(yōu)勢。百泰派克生物科技基于優(yōu)良的質(zhì)譜平臺與成熟的數(shù)據(jù)分析體系,為科研人員提供靈活、高效、定制化的定量蛋白組分析服務(wù),助力您的每一次科學(xué)發(fā)現(xiàn)更進(jìn)一步。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析,提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),對蛋白序列進(jìn)行分析。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;
2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;
3.質(zhì)譜分析靈敏度高,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,采用金屬元素標(biāo)記物(通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體)標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,再用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.技術(shù)優(yōu)良,*技術(shù)空白
采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。
2.分析數(shù)量大,成本較低
單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,而流式質(zhì)譜技術(shù)一次(單樣本)就可分析至少10^5的細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。
3.應(yīng)用前景大
①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標(biāo)。
百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),MALDI TOF,高效色譜分離技術(shù),提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,建立了完備的質(zhì)量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,軟件審計(jì)追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。
1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù);
2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù);
3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等;
4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務(wù)需求;
5.服務(wù)3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
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