磁珠提取实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光集团,利用荧光信号来实时监测整个PCR进程,然后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析。
病原学检测是动物疾病确诊的关键点,而聚合酶链式反应(PCR)是目前病原检测的常用的分子生物学技术,具有高敏感性的特征。PCR技术发展已日趋完善,并在此基础上建立了实时荧光定量PCR、套式、多重、降落PCR等技术,逐渐成为实验室常规检测手段。
该技术已经被广泛应用于临床疾病诊断各种传染病诊断和疗效评价;临床疾病诊断动物疾病检测;食源微生物、食品过敏源、转基因研究等食品安全操作等等各个领域。
扩增曲线是PCR过程中,以循环数为横坐标,以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映qPCR的动态进程;溶解曲线是用来验证扩增产物特异性的,如果产物是单一条带,溶解曲线就会出现单峰,如果有引物二聚体或其它非特异性扩增,就会出现至少两个峰。
磁珠提取实时荧光定量PCR在基因分型中的应用:
例如SNP检测,甲基化检测等。
SNP检测是确定一对染色体的每种基因的两个拷贝,哪种点突变在这两个拷贝中存在,因此利用荧光定量PCR方法,并配合芯片技术可以快速灵敏的检测到SNP结果。
DNA甲基化是Z早发现的基因表观修饰方式之一,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。
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