Cas14a检测系统用DNA荧光-淬灭标记荧光探针上?；莩仙锵只豕┯?/strong>

Cas14a核酸酶是一种内切核酸酶，其在tracrRNA:crRNA（或sgRNA）的引导下，特异结合并切割靶标ssDNA，且无需PAM位点。相比于其他的Cas蛋白，Cas14蛋白的分子量普遍较?。?00-700aa）；与Cas12类似，Cas14a也可以结合靶标核酸并激活其ssDNA反式切割活性，从而被应用于靶标核酸的分子检测；与Cas12不同的是，Cas14a只能结合ssDNA靶标，因此经过扩增富集的靶标核酸需使用T7核酸外切酶进行处理，且其中一条扩增引物需要使用磷硫?；奘我匀繁7核酸外切酶仅切割其中一条链，从而留下ssDNA靶标链以用于Cas14a介导的分子检测。

Cas14a酶的附加DNA酶切功能，可以切割特定单链DNA探针（荧光和淬灭标记），使用5'端带有荧光物质（如：FAM等)，3'端带有淬灭物质（如:BHQ1等）的双标记荧光探针进行荧光检测的方法。当探针完整时，5'端的荧光物质受到3'端的淬灭物质的制约，不能发出荧光。而当双标记荧光探针被分解后，5'端的荧光物质便会游离出来，发出荧光，实现核酸检测。RPA扩增的双链DNA，在crRNA的引导下Cas12a可以切割双链模板DNA和荧光标记探针，探针被水解后释放出荧光信号，通过检测荧光信号便可知道是否有DNA模板。

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