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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠椎間盤(pán)髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠椎間盤(pán)髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠椎間盤(pán)髓核原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 椎間盤(pán)組織 |
英文名稱(chēng) | Mouse Nucleus Pulposus cells | 貨號(hào) | YS-01X7456 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠椎間盤(pán)髓核細(xì)胞分離椎間盤(pán)組織；椎間盤(pán)是位于脊柱兩椎體之間，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質(zhì)；周?chē)康睦w維環(huán)，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來(lái)。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤(pán)結(jié)構(gòu)的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。嬰幼兒時(shí)期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時(shí)體積大而松散，位于椎間盤(pán)的中央，至成年時(shí)位置移至椎間盤(pán)的中后部；在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復(fù)合體、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長(zhǎng)，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
GH3, 大鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤 | 核糖體p70 S6蛋白激酶抗體 |
V5 tag標(biāo)簽抗體 | 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶4抗體 |
錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激酶ANKK1抗體 | 電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白脫氫酶抗體 |
病樣蛋白1抗體 | 清道夫受體B2抗體 |
血管緊張素Ⅱ受體2抗體 | 鉀電壓閥門(mén)通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體 |
大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | CL-0260BC-021(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人胃腺癌細(xì)胞;SGC-7901 [SGC7901] 大鼠腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | MLTC-1 小鼠間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 |
大鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IL18 Protein Mouse 重組小鼠 IL18 / IL-18 蛋白 |
NCI-H209 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | CL-0301M-NFS-60 (小鼠白血病細(xì)胞G-CSF依賴(lài)性)5×106cells/瓶×2 |
MDBK (NBL-1)牛腎細(xì)胞 MDBK (NBL-1) of bovine kidney cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 小鼠椎間盤(pán)髓核原代細(xì)胞電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白脫氫酶抗體 |
猴腎細(xì)胞;vero IgRCD4- | NRK-49F細(xì)胞，大鼠腎成纖微細(xì)胞 RT4(膀胱癌細(xì)胞) 豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL3 |
人角膜成纖維細(xì)胞 (HcorF)( 5×105 ) EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細(xì)胞 Rattus | 鼬肺上皮細(xì)胞;MV-1-Lu |
人腦瘤細(xì)胞;SF767 | 調(diào)控周期蛋白依賴(lài)蛋白激酶SEI1抗體 |
鈣調(diào)酸酶調(diào)節(jié)蛋白1抗體（唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白1） | 人纖維環(huán)細(xì)胞HAFC |
原鈣粘附蛋白α7抗體 | 丙型肝炎病毒-NS1抗體 |
類(lèi)狀瘤病毒16/18 E6抗體 | 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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