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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的雞腎小管上皮采用篩網(wǎng)過濾、膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的雞腎小管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 雞腎小管上皮原代細胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Chicken Renal Tubular Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7034 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
雞腎小管上皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠端小管三部分；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)，于腎小體附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為遠曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細胞是腎小管外面的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術(shù)，目前該細胞分離方法有酶分離法、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法、顯微解剖分離法、流式細胞儀分離法等。腎小管上皮細胞主要功能：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進入終尿；③細胞能分泌炎癥介質(zhì)如細胞因子和趨化因子，通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎癥反應(yīng)；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發(fā)生。隨著對腎間質(zhì)纖維化機制研究的日漸加深，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
中國倉鼠肺細胞;CHL 卵巢癌細胞，NIH:OVCAR-3細胞 L8824細胞，草魚肝臟細胞 | Rhesus antibody Rh GIP 胃泌素抑制肽抗體 規(guī)格 0.2ml |
MART/Melan-A(Human Melanoma Marker A) ELISA Kit 人黑色素瘤標記物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗親和素 0.1ml |
Inhibin Alpha： 抑制素A/Inhibin α抗體 0.1ml | VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
Rhesus antibody Rh RLBP1L1 結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-κOR/FITC 熒光素標記kappa型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TNK1 (Tyr277) 0酸化非受體型酪蛋白激酶Tnk1抗體 規(guī)格 0.1ml | Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白 96T |
人胚皮膚成纖維細胞;CCC-ESF-1 | F344大鼠骨髓間質(zhì)干細胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells |
HME2細胞，人黑色素瘤細胞 干酪乳桿菌干酪亞種 人癌細胞;MCF7 | USMC(大鼠血管平滑肌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;HH-16 | 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞;C6 |
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1 | 間充質(zhì)干細胞軟骨細胞分化生長添加物MCDS |
RM-1細胞，前列腺癌細胞 人胚胎腸粘膜細胞,CCC-HIE-2細胞 恒河猴腎細胞;RM-2 | 雞腎小管上皮原代細胞VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
T-106AIV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CSNK2A1 Others Human 人 CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H012人支氣管平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL |
人腎透明細胞癌;Caki-1 | Rhesus antibody Rh APS APS抗體 規(guī)格 0.1ml |
BTBD17： BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 0.2ml | NCI-H520 肺鱗癌 |
Anti-RELMa/FITC 熒光素標記抵抗素樣分子α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PPARGC1A： 過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體 0.1ml |
Anti-CD133 Anti-gen/FITC 熒光素標記造血干細胞抗原CD133抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人胚皮膚成纖維細胞;CCC-ESF-1 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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