ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作因素

1 加樣

加樣器是一種比較精密的工具，其在長時間使用時會因機(jī)械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn)，因此必須定期對加液器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。每次加不同的標(biāo)本均需更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染；加樣速度不可太快，以免將標(biāo)本加在孔壁上部，并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡，加樣時還應(yīng)注意操作時差對結(jié)果的影響，尤其對競爭法檢測結(jié)果影響更大。因此建議在加酶結(jié)合物和底物時用多道加液器，或者雙人同時加樣以減少操作時差對結(jié)果的影響，另外有些項目在檢測前需要稀釋以減少非特異性反應(yīng)。稀釋的方式非常重要，*方式是采用振蕩器混勻，不可隨意改變混勻方式。

2 溫育

2.1溫育的溫度：育常采用的溫度有43 、37℃、室溫或4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的溫育溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的zui適反應(yīng)溫度?？乖贵w反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2 h 產(chǎn)物的生成可達(dá)，為加速反應(yīng)，可在一定范圍內(nèi)提高反應(yīng)的溫度并在反應(yīng)過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率?？乖贵w反應(yīng)在4℃更為*，形成的產(chǎn)物更多、更穩(wěn)定，但因所需時間太長，在ELISA檢測中一般不予采用。

2.2溫育的方式：溫育方式常采用溫箱法、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結(jié)果的吸光度差異（即“邊緣效應(yīng)”）?？蓪LISA板置于水浴箱中，板底應(yīng)貼著水面，使溫度迅速平衡，為避免蒸發(fā)，可用塑料貼封紙覆蓋板孔。若用溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料（如金屬等），在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。溫育過程中每塊反應(yīng)板不能重疊放置，防止溫度擴(kuò)散的不均勻性。