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細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察和檢定

時(shí)間:2018/5/22閱讀:447
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細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察及鑒定:細(xì)胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)特征,并作相差攝影,同時(shí)進(jìn)行常規(guī)HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學(xué)法,在6孔培養(yǎng)板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細(xì)胞懸液,待細(xì)胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min,PBS沖洗3次,每次2min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多抗工作液,放入濕盒內(nèi)4℃過(guò)夜,同時(shí)另一蓋玻片不加一抗作陰性對(duì)照。次日,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加辣根酶標(biāo)記的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS沖洗3次,每次2min,用DAB底物混合工作液顯色,顯微鏡下觀察,待出現(xiàn)特異性染色后,終止顯色,進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明,封片,相差顯微鏡下觀察攝影。

細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察:相差倒置顯微鏡下觀察,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞貼壁單層生長(zhǎng),呈短梭狀或鋪路石樣鑲嵌排列,細(xì)胞為扁平多角形,邊界清楚,胞漿豐富。胞核清晰可見(jiàn),為圓形或橢圓形。原代培養(yǎng)細(xì)胞,于接種后2h開(kāi)始貼壁生長(zhǎng),傳代細(xì)胞約半小時(shí)后即開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)。原代細(xì)胞一周左右可長(zhǎng)滿(mǎn),傳代細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,有時(shí)可見(jiàn)多核細(xì)胞。

Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定:細(xì)胞株Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色可見(jiàn)細(xì)胞呈圓形、梭形或多邊形,胞漿內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒,核周密集,而對(duì)照組內(nèi)未見(jiàn)著色。證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。

 磷酸化谷氨酸受體1IgG 人抗甲型肝炎病毒IgG(anti-HAV) 

 磷酸化谷氨酸受體1IgG 人抗肌內(nèi)膜IgA(EMA IgA)

 磷酸化谷氨酸受體2AIgG 人抗肌聯(lián)蛋白(TTN)

 磷酸化谷氨酸受體2AIgG 人抗肌動(dòng)蛋白(AAA)

 磷酸化谷氨酸受體2BIgG 人抗環(huán)胍氨酸肽(CCP)

 磷酸化谷氨酸受體2BIgG 人抗呼吸道合胞病毒(RSV)

 磷酸化過(guò)氧化酶活化增生受體γIgG 人抗紅(RBC) 

 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶IgG 人抗丁型肝炎病毒(anti-HDV) 
細(xì)胞株

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