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- 10628ES 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):43更新時間:2025-06-06 08:36:48
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
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本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體 T7 RNA 聚合酶,是對野生型T7進行了改造優(yōu)化,突變得到的可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA 聚合酶。以含有 T7 啟動子序列的雙鏈 DNA 為模板,以 NTP 為底物,合成與啟動子下游的反向單鏈 DNA 互補的RNA。雙鏈線性平末端或 5’突出末端 DNA均可作為 T7 RNA 聚合酶的底物模板,因此線性質(zhì)粒、PCR 產(chǎn)物均可用作體外合成 RNA 的模板。
1. 高效低dsRNA合成
dsRNA含量顯著降低:與傳統(tǒng)T7 RNA聚合酶相比,dsRNA含量降低了至少10倍以上,有效避免了dsRNA引發(fā)的免疫激活和對mRNA功能的干擾。
高產(chǎn)量:mRNA產(chǎn)量穩(wěn)定在9mg/mL以上,滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需要。
高完整度:轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的完整度不低于野生型T7 RNA聚合酶,確保mRNA的質(zhì)量和功能。
2. 高效加帽與低投入
高加帽率:片段加帽率均超過99%,確保mRNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。
低Cap analog投入量:在不同片段長度下,Cap analog投入量降低至2.5mM,仍能實現(xiàn)優(yōu)異的加帽率,顯著降低了生產(chǎn)成本。
3. 優(yōu)化的篩選與驗證
雙重篩選策略:通過構(gòu)建隨機文庫與FADS高通量篩選方法,以及半理性設(shè)計與微孔板技術(shù),篩選出超過10^6的隨機突變文庫,最終選出一款性能的突變體進行商品化應(yīng)用。
產(chǎn)品特性:
來源 | 重組 E. coli |
最適溫度 | 37℃ |
活性 | 250 U/μL |
宿主核酸殘留 | <10 fg/U |
宿主蛋白殘留 | <50 ppm |
RNA 酶殘留 | 陰性 |
儲存緩沖液 | 50mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%(v/v)甘油,pH7.9@25℃ |
活性單位定義 | 在 37℃、pH8.0 的條件下,1 h 內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為一個活性單位。 |
1、 在不同長度的應(yīng)用場景下,dsRNA無論跟WT T7 ,還是競品,在保證其他指標不降的前提下,dsRNA 均有極顯著下降。
片段長度 | T7 RNA pol | 產(chǎn)量(mg/mL) | 完整度(%) | dsRNA含量((1ug RNA產(chǎn)生 ng的dsRNA) |
4K | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0.4273 |
T7-低dsRNA | 12.1 | 89.9 | 0.0129 | |
競品A | 11.0 | 87.8 | 0.0323 | |
9K | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
T7-低dsRNA | 9.0 | 82.0 | 0.0379 | |
競品A | 7.2 | 78.7 | 0.1805 |
2、降低Cap analog的投入量,在不同的片段長度,以及與WT的對比下,投入量降低到2.5mM, 仍能得到優(yōu)異的加帽率。同時在細胞層面上,也能得到優(yōu)異的表現(xiàn)。
Cap analog投入量(mM) | 加帽率(%)-4K | 1K | |
WT | mutant | WT | |
10 | 100 | 100 | 100 |
5 | 100 | 100 | 100 |
2.5 | 100 | 100 | 99.7 |
-25 ~ -15℃保存,有效期1年。