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精品推荐|您还在为核酸残留的问题而烦恼吗？
核酸残留是生物样本制备中常常遇到的问题。在蛋白纯化的过程中，如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白纯化的得率很低、蛋白检测的结果很差，那么您的样本可能遭受了核酸残留的污染。
一、快速解决蛋白中核酸残留问题，能带来什么收益？
（1）契合病毒文库构建，提高测序覆盖率
并且研究者提供了一种可获得HIV测序文库的方案HIV-SMART，其中全能核酸酶的运用，可显著提高HIV病毒测序覆盖度，且不影响病毒核酸的回收率。如下图：
图1 （+）添加和（-）不添加全能核酸酶处理的CHU1756NGS覆盖图[1]
（2）降低细胞破碎后的粘度
全能核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低细胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分离效果，使之易于过滤（尤其是超滤），利于下游层析纯化操作。
图2 细胞裂解液Benonase处理（A）和未处理（B）比较图
（3）提高生化分析样品的回收率
在ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程中，用全能核酸酶处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，并提高回收率。
图3小鼠脑核蛋白Benonase处理（A）和未处理（B）双向电泳比较图[2]
（4）核酸去除已经走入CAR-T治疗相关行业（慢病毒包装）
二、翊圣全能核酸酶，匹配市场应用，快速解决核酸残留！
翊圣生物研发团队利用—流的基因工程改造技术，研制而成的核酸去除的—全能核酸酶，可高效降解任何形式（双链，单链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性，能有效降低蛋白样品粘度，去除蛋白样品中核酸的残留，且无蛋白酶活性残留。既保证了产品的纯度与酶活，又确保了产品的稳定性，目标客户攘括工业端与科研端两大科学研究链，可满足广大生物研究者的基本需求。
（1）严格把控，品质优先
图4 核酸酶纯度验证（Purity＞90%） 图5 全能核酸酶酶活效率验证（＞250U/mg）
（2）核酸酶*特性
a、耐受性强
能够与多种细胞裂解液同时使用，如RIPA；与含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。
试剂 | 耐受剂量 | 耐受程度 |
盐酸胍 | >100 mM | *抑制Benzonase活性 |
EDTA | 1 mM | 部分抑制Benzonase活性 |
5 mM | 活性丧失90% | |
PMSF | 1 mM | 不会抑制Benzonase活性 |
Triton® X-100 | 浓度<0.4% | 保持70%的活性 |
浓度<0.4%<1% | 活性急剧降低 | |
浓度＞1% | 活性丧失70% | |
SDS | 浓度在0.1%~1% | 活性急剧降低 |
尿素 | >6 M | 活性急剧降低 |
b、操作简易，轻松使用
推荐使用条件
条件参数 | 条件 | 有效条件 |
Mg2+ | 1-2 mM | 1-10 mM |
pH | 8-9 | 6-10 |
温度 | 37℃ | 0-42℃ |
DTT | 0-100 mM | >0 mM |
巯基乙醇 | 0-100 mM | >0 mM |
单价阳离子 | 0-20 mM | 0-150 mM |
磷酸根离子 | 0-10 mM | 0-100 mM |
推荐使用量
实验类型 | 蛋白电泳样品 | 药物生产-1g | 疫苗、病毒生产-1L | 细胞培养-1L |
推荐产品 | Benzonase（科研级，20156） | Benzonase（无内毒素级，20125） | ||
低要求 | 125 U（0.5 µL） | 25 U/mL（1 µL） | 0.1 U/mL（0.4 µL） | 0.1 U/mL（0.4 µL） |
建议用量 | 500 U（2 µL） | 250 U/mL（10 µL） | 25 U/mL（100 µL） | 5 U/mL（20 µL） |
孵育时间 | 通常作用时间37℃在15~60 min；25℃在30~120 min； | |||
注：以上仅仅是推荐，可根据实验自主摸索///优实验条件。 | ||||
（3）FAQ——如何摆脱后续核酸酶干扰？
措施1：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，条件会造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃处理30 min等；
措施2：对于带某种标签的Benzonase核酸酶可通过相应的标签蛋白纯化树脂直接去除，去除率>95%；
措施3：对于不带标签的Benzonase核酸酶，可通过色谱纯化去除核酸酶，然后可通过检测残留活性或ELISA检测来判断去除是否成功。
三、产品订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
Benzonase Nuclease全能核酸酶 | 20156ES25 | 25 KU |
20156ES50 | 50 KU | |
20156ES60 | 100 KU | |
Benzonase Nuclease (Endotoxin-free)? 全能核酸酶（无内毒素） | 20125ES25 | 25 KU |
20125ES50 | 50 KU | |
20125ES60 | 100 KU | |
Benzonase Nuclease (GMP)? 全能核酸酶（GMP级） | 20127ES25 | 25 KU |
20127ES50 | 50 KU | |
20127ES60 | 100 KU |
四、文献引用
[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.
[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.
