一、“猪端粒酶(TE)ELISA试剂盒”实验原理：

    ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

二、ELISA常用的几种方法：
1、双抗体夹心法测定抗原
将抗原免疫*种动物获得的抗体吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗体复合物; 
加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;
加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体); 
加底物。底物的降解量＝抗原量。
2、直接法测定抗原 
将抗原吸附在载体表面；
加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；
加底物。底物的降解量＝抗原量。 
3、间接法测定抗体
将抗原吸附于固相载体表面；
加抗体, 形成抗原-抗体复合物；
加酶标抗体；
加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。

三、“猪端粒酶(TE)ELISA试剂盒”操作注意事项：

1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

四、elisa试剂盒常见问题：

1.产品有哪几种规格？可检测多少个样本？ 
产品分为48T和96T两种规格。 每次实验的标准曲线一般设7个不同浓度，加上空白孔，标准曲线一共需要8个孔。因此，一个48T试剂盒zui多可以测定40个样本（不做重复且一次用完），一个96T试剂盒zui多可以测定88个样本（不做重复且一次用完）?？梢愿菔导恃臼亢褪笛榧苹≡窈鲜实牟饭娓?。  
2.48T和96T的试剂盒有哪些不同？ 
48T和96T的试剂盒，每个孔的反应体系都是*一样的。不同的是试剂盒中各组分的规格，详见说明书。  
3.产品的稳定性如何？ 
产品在研发前期已通过严格的稳定测试，发货前亦须通过检测并提供质检报告，在市场上深受广大客户的赞许！ 

五、洗板方法：

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

七、结果判断：

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样

八、“猪端粒酶(TE)ELISA试剂盒”试剂盒性能：

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：zui低检测浓度小于1.0pg/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

免责声明：

1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。