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抗體粗純化試劑盒的操作程序和結(jié)果判斷

閱讀:1344      發(fā)布時間:2019-7-25
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 抗體粗純化試劑盒的操作程序:
    1.洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液(2號液)按1:10稀釋,如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。
    2.樣本稀釋 用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清樣本按1:100稀釋,如取5ul樣本與495ul樣本稀釋液,混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋,直接加樣。
    3.加樣反應(yīng) 每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔(分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后,甩去孔內(nèi)液體,每孔注滿工作洗滌液洗滌3次,每次均需停留1分鐘后再甩凈,拍干。
    4.加酶反應(yīng) 除空白對照孔外,每孔加酶結(jié)合物(1號液) 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后,甩去孔內(nèi)液體,如上洗滌,拍干。
    5.顯色反應(yīng) 加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴,混勻,37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴,終止反應(yīng)(加終止液后,藍色會變?yōu)辄S色)并判讀結(jié)果。
抗體粗純化試劑盒的結(jié)果判斷:
    以空白對照調(diào)零,用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度(A值)。待檢樣本孔A值大于等于陰性對照A值的3.1倍者判為陽性。如陰性對照A值低于0.1時按0.1計算。
抗體粗純化試劑盒的注意事項:
    1.抗體粗純化試劑盒于2-8℃保存,每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。
    2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。
    3.抗體粗純化試劑盒中終止液具有腐蝕性,要小心使用。
    4.瓶蓋每次使用后要擰緊,各瓶蓋之間不可混用。不同批號抗體粗純化試劑盒的試劑組份不可混用。
    5.試驗樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清或血漿。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。
    6.37℃孵育時,建議使用水浴箱。如無條件,可在溫箱中放置濕盒進行反應(yīng)并同時用不干膠膜封蓋板孔。

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