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上海宝叶生物科技有限公司
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[器材和试剂]
● PCR试剂和设备
● Winard PCR纯化试剂盒（Promega）
● 定制的DNA引物
● VL—NotI引物 （5，—GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC ACC TAG CAC GGT CAG CTT GGT CCC TCC GCC GAA CAC CCA ACC—3’）
● LMB3引物
● 用于scFv基因文库限制性消化的试剂和设备
● 已扩增的scFv基因文库DNA
[方法]
1．配制4个50ul PCR反应混合液， 包含：
● 去离子水，35．5ul
● 20×dNTP（每种5mmol/L），2．5ul
● 10×Vent聚合酶缓冲液，5．0ul
● LMB3引物 （10pmol/ul）， 2．5ul
● VL—NotI引物 （10pmol/ul）， 2．5ul
● scFV基因模板DNA（100ng）， 1ul
● VentDNA聚合酶（2单位），1．0ul
2．在有加热盖的热循环仪内，加热反应混合液到94℃5分钟。
3．以94℃1分钟、42℃1分钟、72℃2分钟的条件共循环30次，扩增VL基因。
4．用Winard PCR纯化试剂盒纯化PCR产物。
5．用NcoI和NotI消化PCR产物。
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