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DNA限制酶分析与切割

2013-2-21  阅读(1227)

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仪器用具:
37℃及65℃水浴或恒温槽

药品试剂:
质体pBluescript II SK (-)
限制酶:BamHI, PvuII 及ScaI (浓度均为10 units/μL, Invitrogen)
10×Reaction buffer 6 (0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl)
无菌水

方法步骤:
1) 取7 支微量离心管,依下表所列体积 (单位 μL) 依序加于管壁不同位置上。

◆ 每次吸取限制酶时,请换一支新的微量移液器头以免造成污染。
总体积为20 μL,短暂离心后,以微量移液器头轻轻混合,#1 置冰浴中,其余各管置于37℃反应1 h。
2) 置65℃水浴15 min 中止反应后,移置冰浴冷却,即可进行电泳分析。

 

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