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产品简介

产品简介： 本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×10⁶个Hela细胞或40mg组织）。

规格：50T/100T

产品内容：

保存：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。

操作方法：

裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

一、对于体外培养细胞：

1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。

2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞。500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。

3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

4．每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂（2×10⁶个细胞沉淀的体积约20μl或40mg）。

5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不会导致蛋白产量降低。

6．冰浴10分钟。

7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃ 12000～16000g离心10分钟。

8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。

9．沉淀即为细胞核，要吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入50-100μl核蛋白抽提试剂。

10．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长）至沉淀分开，冰浴10分钟。

11．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g离心10分钟。12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。    对于组织样品：    把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg组织加入200μl-500μl PBS，用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。

注意事项：

1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号PC0020)测定蛋白浓度。

2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。

3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

备注：以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

公司简介

上海索莱宝生物科技有限公司是一家集销售生化试剂、实验耗材、自产分子生物学产品为一体，并能提供的专业性生物科技公司。公司秉承“以客户为中心，以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨"的发展理念，在依靠客户的大力支持和员工的不懈努力下获得了快速的成长。公司织结构清晰，内部管理科学，拥有一支既分工细致又高度合作的年轻化队伍，保持了各个部门之间的高效合作运转，充分保障了公司在充满竞争的市场中处于地位。公司注重与*合作，目前已与 Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf等企业结成紧密的合作伙伴关系，代理其世界的*产品，并在全国各地设有分销机构。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高品质的产品和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、竞争力的价格，所有这些都保证了我们向您提供的是专业的服务！立足北京，上海，*，随着产品营销战略的不断延伸，我们将逐步发展成为*的专业性生物科技公司。我们希望能够和尊敬的客户一起，利用各自的资源优势和勇于进取的敬业精神，为中国生命科学研究的发展作出更多的贡献。为了更好、更全面的发展，现公司正在诚招各地代商和招聘若干销售、研发人员，欢迎垂询并期待您的加入！

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