可溶性IL-2B含量的測(cè)定

    測(cè)定可溶性IL-2R（solubleIL-2R，slL-2R）含量的方法簡(jiǎn)便，取材容易，所需樣本量小。因此不但可用于免疫學(xué)基礎(chǔ)理論研究，還可作為臨床某些疾病輔助診斷、病情監(jiān)測(cè)及藥效觀察的一項(xiàng)指標(biāo)。

    根據(jù)檢測(cè)原理不同，slL-2R含量的測(cè)定方法主要有二類，即雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法，其中以雙抗體夾心法更為簡(jiǎn)便，敏感且常用。

    1．雙抗體夾心法  需選用兩株針對(duì)slL-2R不同位點(diǎn)的McAb，其原理、操作步驟及注意事項(xiàng)請(qǐng)參閱第五章。若需提高敏感度，尚可使用熒光ELISA夾心法，即采用生物素標(biāo)記McAb2，進(jìn)行生物素-親合素-酶放大步驟，并采用熒光物質(zhì)為底物，其敏感度可達(dá)10U／mL以下，但操作步驟多，實(shí)驗(yàn)要求高。

    2．ELISA競(jìng)爭(zhēng)法  本法是用純化的或重組IL-2R（P55）蛋白包被微孔板，同時(shí)加入已知量的抗IL-2RMcAb和待檢slL-2R。待檢slL-2R與包被的純化IL-2R蛋白競(jìng)爭(zhēng)與抗IL-2R抗體結(jié)合。從抗IL-2R抗體與包被IL-2R蛋白結(jié)合受抑制的程度計(jì)算待測(cè)slL-2R的含量，操作步驟如下：

    （1）以重組或純化IL-2R（1>55）40 000U／mL{g被聚苯乙烯板，每孔100t~L，4℃過(guò)夜。

    （2）1％BSA-PBS封閉，每孔200~zL，置室溫2ho

    （3）洗滌后加入50ul不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣品，稀釋液為1％BSA／PBS。同時(shí)加入50ul FITC標(biāo)記的抗IL-2RMcAb（0．2ug／mL），充分混勻置室溫2h（FITC為異硫氰酸熒光素，這里僅作為半抗原）。

    （4）洗滌后各孔加入堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC 100gL，置室溫1h。

    （5）洗滌后各孔加入1001~L底物溶液（對(duì)硝基苯磷酸鹽1mg／mL，用pH9．8的二乙醇胺緩沖液溶解）。以波長(zhǎng)405nm測(cè)OD值。

    （6）以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值繪制競(jìng)爭(zhēng)抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，OD值隨slL-2R濃度的增加而降低。

    （7）根據(jù)待檢樣品的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出slL-2R含量，不需計(jì)算抑制百分率。

    （8）注意事項(xiàng)：

    ①本方法的敏感度為5 000U／mL，因此不適合檢查正常人標(biāo)本，僅適用于檢測(cè)接受抗IL-2R抗體治療，毛細(xì)胞性白血病等slL-2R水平極度增高的患者，以及作為檢測(cè)移植排斥反應(yīng)的指標(biāo)；

    ②若無(wú)純化或重組IL-2R蛋白，可用PHA刺激的末梢血單個(gè)核細(xì)胞或MT-2細(xì)胞包被微孔板，吹干，固定，用1％H202處理抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶后即可用。

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