Bio-Rad伯乐T100扩增仪pcr仪

?样本容量?：支持96个0.2 ml试管、0.2 ml八联管或1个96孔板?。

?温度范围?：4-100°C?。

?温度精度?：±0.5°C设定温度?。

?升降温速率?：最大升降温速率为4°C/sec，平均升降温速率为2.5°C/sec?。

?温度均匀性?：±0.5°C（孔间温度差），在30秒内达到目标温度?。

?梯度范围?：30-100°C，温度差异范围为1-25°C?。

?显示屏?：5.7英寸VGA彩色触摸屏?。

?内存?：500个典型程序，USB闪存驱动器可无限扩展?。

?尺寸和重量?：尺寸为26 x 47 x 23 cm，重量为9 kg?。

Bio-Rad伯乐T100扩增仪pcr仪

伯乐 T100 PCR 仪标准操作流程 (SOP)

准备工作:

开启仪器电源： 按下仪器背面的电源开关 (通常位于左下角或右下角)。

仪器自检与预热： 仪器启动后会进行自检，完成后主屏幕会显示系统信息、当前模块温度和状态 (通常显示“Idle”或“Standby”)。仪器可能需要几分钟达到设定的待机温度 (通常是 4°C 或 10°C)。

准备 PCR 反应体系:

在冰上或冷板上，按照你的实验方案 (Protocol) 在 PCR 管或 PCR 板中配制好所有反应混合液。

盖紧盖子： 确保所有反应管的盖子或 PCR 板的封膜都盖紧、密封 ，防止加热过程中蒸发或污染。

短暂离心 (可选但推荐)： 将配好的反应管/板短暂离心 (例如 5-10 秒)，使液体沉到管底/孔底，并去除管壁/孔壁的气泡。

放置样品:

打开热盖： 按下仪器正面右上角的 “Lid” 按钮抬起热盖。热盖会升起。

放置样品架 (样本块适配器)：

如果使用的是单管或排管，通常是将它们直接放入样本块 (Sample Block) 的孔中。

如果使用的是 96 孔 PCR 板，需要先将 银色的金属样品架 (Sample Block Adapter) 小心地放入样本块中。注意方向： 样品架有定位销，确保它卡入样本块的定位孔中，放置平稳。

将盖好盖子的 PCR 管或密封好的 PCR 板小心地放入样品架/样本块中。确保放置平稳。

关闭热盖： 轻轻按下热盖中央，直到听到轻微的“咔嗒”声或感觉到它自动吸合锁紧。务必确保热盖关闭且夹紧！ 屏幕状态会显示 “Lid Closed”。

创建或选择程序 (Protocol):

在主屏幕上，使用导航旋钮 (中央的大旋钮) 选择 “Protocol” 菜单，按旋钮确认。

新建程序：

选择 “New” 。

输入程序名称： 使用旋钮选择字母和数字，输入一个容易识别的名称 (如 “MyGene_PCR”)，按旋钮确认。

添加步骤： 选择 “Add Step” 或 “Insert Step” 。

设定步骤参数：

Temp: 使用旋钮输入温度值 (℃)。

Time: 使用旋钮输入该温度的持续时间 (格式通常是 分:秒，如 1:30 表示 1分30秒)。

Repeat: 设置该步骤的重复次数 (通常对于单个变性/退火/延伸步骤设为1)。

Goto: 设置该步骤完成后跳转到的步骤号 (用于循环)。

Increment: (高级功能，梯度PCR时用) 设置温度递增/减量。默认关。

Auto: (高级功能) 设置该步骤是否使用预设的快速升温/降温速率。通常保持默认。

按旋钮确认该步骤设置。

重复添加步骤： 根据你的 PCR 程序，依次添加所有步骤：

初始变性 (Initial Denaturation)： 如 95°C， 5 min。

循环主体 (Cycling)： 通常包括：

变性 (Denaturation)： 如 95°C， 30 sec。

退火 (Annealing)： 如 55-60°C， 30 sec (具体温度根据引物Tm值优化)。

延伸 (Extension)： 如 72°C， 1 min/kb (根据产物长度设定)。

设置循环次数： 在循环主体的第一个步骤 (通常是变性步骤) 中，将 Repeat 设置为 0 ，并在 Goto 中设置为循环体末尾的步骤号 (通常是延伸步骤)。然后在循环体最后一个步骤 的 Goto 中设置跳转到循环体的第一个步骤 。同时在某个步骤设置 Repeat 为你需要的总循环次数 (如 30x)。(更直观的方式是添加一个“Cycle”步骤来设置循环次数，但T100基础操作通常是按上述设置跳转)。

终延伸 (Final Extension)： 如 72°C， 5-10 min。

保温 (Hold)： 如 4°C 或 10°C 。

设定热盖温度: 在主程序编辑界面或专门的设置菜单中，找到 Lid Temp 选项。强烈建议将热盖温度设置为比反应体系中最高温度高 5-10°C (例如，如果最高变性温度是95°C，建议设Lid Temp为105°C)。这是防止管内液体在管盖顶部冷凝的关键！按旋钮确认。

保存程序： 完成所有步骤设置后，选择 “Save” (通常按 “Save” 软键 F1-F5 中的一个)。输入的名称会出现在程序列表中。

选择现有程序： 如果在 “Protocol” 菜单中已有保存好的程序，使用旋钮滚动选择所需程序名称，按旋钮确认加载。

运行前确认:

程序加载后，屏幕会显示程序的详细信息：名称、各步骤温度/时间、循环次数、总预计运行时间等。

再次检查：

热盖是否紧闭？ (状态显示 Lid Closed)

样品是否放置平稳？

程序参数是否正确？ (特别是关键温度、时间、循环次数、热盖温度)

按 “Start” 按钮 (通常是一个绿色的实体按钮或屏幕软键)。

运行程序:

按下 “Start” 后，仪器会提示确认 (通常是 “Start Run?”)。选择 “Yes” 或按 “Start” 按钮再次确认 (取决于具体界面)。

仪器开始运行：

热盖会先升温到设定温度。

样本块开始按照程序设定的温度和时间进行变化。

屏幕会实时显示当前运行的步骤、剩余时间、当前温度、设定温度、总剩余时间等信息。

运行过程中，不要打开热盖！ 会中断程序并可能损坏样品。

程序结束:

当程序运行到最后的保温步骤 (如 4°C) 并达到设定温度时，仪器会发出提示音 (嘀嘀声)，屏幕显示 “Run Complete” 或类似信息，状态变为 “Idle/Hold”。

打开热盖： 按下 “Lid” 按钮抬起热盖。

取出样品： 戴好防热手套！ 样本块在刚结束高温步骤后会很烫。小心取出 PCR 管或板，转移到冰上或下一步实验所需的地方。

关闭仪器或准备下次运行：

如果当天不再使用，可以关闭仪器电源。

如果很快要运行下一轮，可以保持仪器处于待机保温状态 (通常是4°C)，并盖好热盖。

日常维护 (重要！):

清洁样本块和热盖： 定期 (如每周或每次污染风险后) 使用 不含棉絮的实验室纸巾 蘸取少量 70%乙醇 或异丙醇，轻轻擦拭样本块表面和热盖底部的接触面。切勿将液体直接倒入样本块孔中！ 等待干燥后再使用。

清洁仪器外壳： 用湿布和温和清洁剂清洁外壳。避免液体流入仪器内部。

保持通风口畅通： 确保仪器周围和背部的通风口不被堵塞。

关键注意事项和安全提示:

高温烫伤： 运行过程中和刚结束时，样本块和热盖温度较高！务必在打开热盖和取放样品时佩戴隔热手套。

盖紧盖子： PCR管盖/PCR板封膜密封不良是实验失败（蒸发、污染）的常见原因。

设置热盖温度： 这是很容易被遗忘但极其关键的一步！ 热盖温度不足会导致冷凝水回流稀释反应液。

程序验证：第一次运行新程序或重要实验前，建议用水或空白反应进行测试运行，检查温度升降是否正常。

污染预防： 操作时佩戴手套，使用无核酸酶枪头和耗材。每次使用前后清洁工作区域。定期清洁仪器表面和样本块。

断电安全： 如果运行过程中意外断电，重新通电后仪器可能会尝试恢复上次运行状态或停在保温步骤。请评估样品状态决定是否继续使用或重新开始。

遵循实验室 SOP： 务必严格遵守你所在实验室针对 T100 PCR 仪制定的具体操作规程和安全规定。

查阅手册： 对于高级功能 (如梯度PCR、程序链接、用户自定义升温速率等)，请参考随机附带的 Bio-Rad T100 Thermal Cycler Instruction Manual 。

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