赛默飞QuantStudio1实时荧光定量PCR（qPCR）仪支持多种荧光检测方法，其核心原理基于染料法（如SYBR Green）和探针法（如TaqMan），通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增过程，从而实现对目标核酸的定量分析。以下是其试剂和染料的工作原理：

一、染料法（SYBR Green）

1、原理：

SYBR Green是一种可嵌入DNA双链小沟的荧光染料，在游离状态下几乎不发光，但一旦与双链DNA（dsDNA）结合，荧光信号增强约1000倍。

2、特点：

优点：成本低，适用于任何PCR产物（无需特异性探针）。

缺点：会结合所有双链DNA（包括引物二聚体和非特异性产物），需通过熔解曲线分析（HRM）验证扩增特异性。

3、QuantStudio1适配性：

已校准支持FAM/SYBR Green I通道（激发/发射波长：~497/520 nm）。

二、探针法（TaqMan）

1、原理：

TaqMan探针是一种寡核苷酸，5′端标记报告荧光基团（如FAM、VIC），3′端标记淬灭基团（如TAMRA）。

当探针完整时，荧光基团的信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq DNA聚合酶的5′→3′外切酶活性切割探针，使荧光基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

2、特点：

优点：特异性高（仅靶序列扩增时产生信号），支持多重检测（不同探针标记不同荧光基团）。

缺点：探针合成成本较高。

3、QuantStudio1适配性：

支持FAM、VIC、ROX等荧光通道，可同时检测3种靶标（如FAM/VIC/ROX三通道检测）。

三、被动参照染料（ROX校正）

作用：

ROX是一种不与DNA结合的荧光染料，用于校正孔间差异（如加样误差、耗材透光度差异）。

QuantStudio1内置ROX校准功能，提高数据准确性。

四、荧光检测系统

QuantStudio1采用：

白光LED光源（宽光谱激发）和 CMOS成像系统，实现96孔同步检测，避免逐孔扫描的时间误差。

滤光片配置：FAM、VIC、ROX三通道，覆盖常见荧光染料需求。

五、总结

QuantStudio1通过染料法和探针法实现高灵敏度（可检测1.5倍差异）和多重检测（3通道），结合ROX校正和同步成像技术，确保数据精准可靠。用户可根据实验需求选择SYBR Green（经济通用）或TaqMan探针（高特异性多重检测）。