標(biāo)題：DH5a-m Electrocompetent Cell，大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

【參數(shù)信息】

英文名稱：DH5a-m Electrocompetent Cell

中文名稱：DH5a-m電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

DH5α-m是兼容DH5α和DH10B菌株的一款克隆菌株，在其基因組中引入mcrA、mcrBC、mrr-、hsdRMS突變，使得從外源攝入的甲基化DNA不被降解，從而利于甲基化DNA的克隆和擴(kuò)繁，適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA，同時(shí)提高了電轉(zhuǎn)效率。

recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

lacZΔM15的存在使其可用于藍(lán)、白斑篩選。

本品是大腸桿菌DH5α-m菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的電擊感受態(tài)，只能用于DNA的電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。

經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞2×1010 cfu/μg DNA。

【作用機(jī)制：電穿孔的分子與物理過(guò)程】

電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的作用機(jī)制基于電穿孔 ，即利用高壓電場(chǎng)瞬時(shí)改變細(xì)胞膜通透性，使外源 DNA進(jìn)入細(xì)胞。

該過(guò)程分為四個(gè)階段：

（一）膜通透性改變的物理基礎(chǔ)

水孔理論：

高壓脈沖使細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層發(fā)生極化，形成瞬態(tài)親水性孔道。水分子在電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)下穿透疏水層，穩(wěn)定孔道結(jié)構(gòu)。

跨膜電壓臨界值：

當(dāng)電場(chǎng)強(qiáng)度超過(guò)閾值，膜電容崩潰，導(dǎo)致非選擇性離子通道開(kāi)放，進(jìn)一步擴(kuò)大孔道。

（二）DNA 內(nèi)化的動(dòng)力學(xué)過(guò)程

電泳與擴(kuò)散作用：

DNA 在電場(chǎng)力作用下 定向遷移至孔道附近，并通過(guò)布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞。

DNA-膜相互作用：

帶負(fù)電的 DNA 與膜脂質(zhì)極性頭基團(tuán)結(jié)合，降低穿透能壘，提高內(nèi)化效率 。

（三）細(xì)胞恢復(fù)與克隆形成

孔道閉合機(jī)制：

脈沖結(jié)束后，膜脂質(zhì)自發(fā)重組，孔道在 毫秒至秒級(jí)時(shí)間內(nèi)閉合。此過(guò)程依賴溫度。

復(fù)蘇與表達(dá)：

細(xì)胞轉(zhuǎn)移至富營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，在 37°C 振蕩培養(yǎng) 1 小時(shí)，修復(fù)膜損傷并表達(dá)抗性基因，終涂布于含抗生素的平板篩選克隆。

【相關(guān)試劑】

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