双荧光素酶检测 基因编辑

双荧光素酶报告基因检测介绍

实验原理

miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区，抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端，与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞，先后加入两种底物荧光素，通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认 miRNA对靶基因的调控效果。

下图为双荧光素酶报告基因检测载体的示意图。

技术应用

通过miRNA靶标的鉴定从而进行miRNA功能的深入研究。

实验流程

实验结果展示

图 1 hsa-miR-9-1 的靶点

筛选结果

1）四组质粒的 293 细胞共转染后的细胞照片；

2）四组细胞的双荧光素酶报告基因检测柱形图。

注：WT为野生型3'UTR 区的萤火虫荧光素酶报告基因质粒，Mut为突变型3'UTR 区的萤火虫荧光素酶报

告基因质粒，结果表明待研究的 miRNA 对靶基因有较明显的调控作用。

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