肝癌标志物表达：高表达甲胎蛋白（AFP），分泌量达 500ng/10?细胞 / 天（ELISA 检测），且表达癌胚抗原（CEA）、异常凝xue酶原（PIVKA-II）等肝癌特异性标志物，免疫荧光阳性率均＞90%，与人类肝癌组织的标志物谱高度吻合。

恶性生物学行为：具有强增殖能力，克隆形成率达 45%（软琼脂集落实验）；在 Transwell 实验中，迁移与侵袭细胞数分别为正常恒河猴肝细胞的 8 倍和 10 倍，基质金属蛋白酶 - 9（MMP-9）分泌量显著升高，模拟肝癌细胞的转移特性。

代谢特征：呈现 “瓦堡效应”，葡萄糖消耗速率为正常肝细胞的 3 倍，乳酸生成量增加 2.5 倍，同时谷an酰胺依赖增强，为肝癌代谢重编程研究提供模型。

基因突变与信号通路解析：通过全基因组测序发现，M12353 细胞存在 TP53 基因缺失与 CTNNB1（β- 连环蛋白）激活突变，导致 Wnt/β- 连环蛋白信号通路持续激活，与人类肝癌的高频突变特征一致。利用 CRISPR-Cas9 技术修复 TP53 后，细胞增殖速率下降 60%，证实该基因突变在肝癌发生中的驱动作用。

肿瘤微环境相互作用研究：构建 M12353 细胞与肝星状细胞共培养模型，发现星状细胞分泌的 IL-6 可激活 STAT3 通路，促进肝癌细胞耐药基因表达（如 ABCB1），阻断 IL-6/STAT3 轴后，细胞对hua疗药物的敏感性提升 2 倍，为靶向肿瘤微环境的治疗提供依据。

hua疗药物敏感性测试：可用于评估肝癌hua疗药物的 efficacy 与毒性。例如，在该细胞系中测试索拉非尼的 IC??=8μM，与临床患者的药物响应浓度一致；联合使用雷帕霉素后，IC??降至 3μM，协同指数（CI）=0.4，证实 mTOR 抑制剂与索拉非尼的协同作用，为联合用药方案提供实验支持。

靶向药物开发：基于其高表达的 EGFR 与 VEGFR，构建靶向药物筛选模型。筛选出的新型 EGFR 抗体偶联药物（ADC）对细胞的杀伤效率达 90%（EC??=0.1μM），且对正常肝细胞毒性低，动物实验显示其可使移植瘤体积缩小 75%，为肝癌靶向治疗提供候选药物。

靶向载体评估：可用于测试肝靶向递送系统的效率。例如，将载药纳米颗粒修饰肝癌细胞特异性肽（针对 AFP 受体），与 M12353 细胞共孵育后，细胞内药物浓度是未修饰颗粒的 5 倍，杀伤效率提升 3 倍，为靶向制剂优化提供数据。

基因治疗验证：作为肝癌基因治疗的模型，评估 CRISPR 基因编辑系统的效果。通过脂质体递送靶向 CTNNB1 的 sgRNA，细胞中 β- 连环蛋白表达量下降 70%，肿瘤细胞凋亡率增加 40%，为基因治疗的临床转化提供安全性与有效性数据。

培养基：DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺、1% 非必需氨基酸，pH 维持在 7.2-7.4，可加入 1% 抗生素混合液预防污染。

传代流程：当细胞融合度达 80% 时，弃旧培养基，PBS 洗涤 2 次，加入 0.25% yi酶 - EDTA 溶液，37℃孵育 5 分钟至细胞脱落，加入含血清的培养基终止消化，按 1:4 比例接种至新培养瓶，避免过度消化影响细胞活性。

冻存?；?/span>：取对数生长期细胞，用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 2×10?个 /mL，程序降温后液氮保存，复苏时 37℃水浴快速解冻，离心去除 DMSO，传代 2 次待细胞状态稳定后使用。

药物敏感性检测：细胞以 5×103 个 / 孔接种 96 孔板，培养 24 小时后加入梯度浓度药物，继续培养 72 小时，通过 CCK-8 法检测细胞活力，计算 IC??值。

侵袭实验：Transwell 上室接种 2×10?个细胞（含 1% 血清的培养基），下室加入含 10% 血清的培养基，培养 48 小时后，固定染色并计数穿过基质胶的细胞数。

优势：

局限性：