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ATPase染色液(钙钴法)/染色剂
产品货号:G2380
供应商:Solarbio
产品规格:5×50ml/盒
有效期:6 个月有效
ATPase染色液(钙钴法)/染色剂 试剂盒组成:
试剂(A): 碱性预孵育液 50ml RT 避光
试剂(B): 酸性预孵育液 50ml RT
试剂(C): ATPase 孵育液 50ml 4℃ 避光
试剂(D): 硝酸钴溶液 50ml RT
试剂(E): ALP 硫化溶液 2×1ml RT 避光
试剂(F): ATPase 对照液 10ml 4℃ 避光
ATPase染色液(钙钴法)/染色剂产品说明 :
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一种水解酶,是催化 ATP 合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键,因而释放大量能量。其催化反应如下:A-P-P-P + H 2 O→A-P-P + H 3 PO 4 +能量。
ATPase染色液(钙钴法)/染色剂原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,终产物为黑色硫化钴沉淀。
ATPase染色液(钙钴法)/染色剂操作步骤( ( 仅供参考) ) :
1. 冰冻切片直接入蒸馏水。
2. 一张切片入碱性预孵育液室温孵育 15min。另一张切片入酸性预孵育液室温孵育 5min,再入碱性预孵育液 30s。
3. 切片同时入 ATPase 孵育液,孵育 30-45min。
4. 1%氯化钙洗三次,每次 1min。。
5. 入硝酸钴溶液 3min,蒸馏水充分洗 4-5 次,流水冲洗 2min。
6. 在上述过程中配制 ALP 硫化工作液,即取试剂(E)用蒸馏水稀释 50 倍, 即为 ALP 硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育 1-2min。
7. 流水洗 10min 后,入蒸馏水。
8. 切片经 95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。二甲苯透明,树胶封片。
ATPase染色液(钙钴法)/染色剂染色结果:
酶所在阳性部位 黑色硫化钴沉淀
肌纤维分型:
肌纤维分型 碱性预孵育液 酸性预孵育液
Ⅰ型 + +++
ⅡA 型 +++ -
Ⅱ B 型 +++ -
Ⅱ C 型 +++ ++
阴性对照(可选):
1、取对照切片,用试剂(F)-ATPase 对照液进行孵育,并与用 ATPase 孵育液孵育的切片进行比较。
两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在,两者不同部位才是 ATP 酶活性所在。
2、将切片入 80℃蒸馏水 10min,再与其他组织切片同时孵育,结果应为阴性。
注意事项:
1. 切片入孵育液前后不可用水冲洗。
2. 若要显示肌肉 ATPase 新鲜组织必须速冻后切片。
3. 若要鉴别肌纤维所属类型,好用连续冰冻切片。应减少切片在室温暴露的时间。
4. ALP 孵育液、ALP 硫化液易失效,好分成小份储存,一经开启立即使用。
5. ALP 硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。