ZYM-SVEC01猪静脉血管内皮细胞系
- 公司名称 上海乾思生物科技有限公司
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- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/7/31 13:03:02
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来源与建立背景
形态与生长特征
功能特性
静脉特异性标志物与功能蛋白:高表达静脉内皮特异性标志物,如 EphB4(阳性率 96%)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin,阳性率 94%),其 EphB4 表达量是 PIEC 细胞的 4 倍,是静脉表型的关键分子;同时表达组织型纤溶酶原激活物(t-PA,阳性率 90%)和血栓调节蛋白(TM,阳性率 88%),抗凝功能活性显著高于 PIEC 细胞(t-PA 分泌量达 12μg/10?细胞 / 天,是 PIEC 的 2.5 倍),能模拟静脉内皮的抗凝优势。
血管生成与屏障功能:在 Matrigel 基质上 48 小时内形成分支较少的管状结构,管腔直径较 PIEC 细胞大 30%(模拟静脉血管特征),血管生成速率虽慢于 PIEC 细胞,但对缺氧的敏感性更高(缺氧条件下 VEGF 分泌量提升 6 倍);体外构建的内皮屏障跨上皮电阻(TEER)值达 150Ω?cm2,通透性高于 PIEC 细胞,符合静脉内皮的生理特征。
病原体敏感性:对猪圆环病毒 2 型、猪流行性腹泻病毒等具有高度敏感性,猪圆环病毒 2 型感染后 72 小时出现典型细胞病变(胞质内包涵体、细胞聚集成团),病毒滴度达 10?.? TCID??/mL,且病毒可通过静脉内皮细胞向周围组织扩散,模拟病毒在静脉系统的播散过程。
静脉疾病机制研究
深静脉血栓模型:在低血流剪切力(5 dyn/cm2)条件下,ZYM-SVEC01 细胞的血小板内皮细胞黏附分子 1(PECAM-1)表达量下降 40%,凝xue酶生成量增加 3 倍,同时纤维蛋白沉积明显,模拟深静脉血栓形成的早期病理变化,其血栓形成相关指标与猪体内模型的一致性达 90%,显著高于 PIEC 细胞系。
静脉瓣膜功能研究:通过该细胞系研究静脉瓣膜内皮细胞的特性,发现瓣膜区细胞的 EphB4 表达量是非瓣膜区的 2 倍,且对剪切力的耐受性更强,为静脉瓣膜功能不全的机制解析提供关键模型。
抗病毒研究与疫苗开发
病毒静脉嗜性研究:利用其对猪圆环病毒 2 型的敏感性,发现病毒通过结合细胞表面的硫suan软骨素 A 进入细胞,感染后可使静脉内皮细胞 t-PA 分泌量下降 60%,抗凝功能受损,揭示病毒导致静脉血栓的分子机制。
疫苗效力评价:作为猪流行性腹泻病毒疫苗的效力检测细胞系,其病毒中和试验结果与仔猪攻毒?;ぢ室恢滦源?85%,较 PIEC 细胞提升 10%,被用于评估疫苗对肠道静脉内皮的保护效果。
药物研发与安全性评价
抗静脉血栓药物筛选:基于其抗凝功能特性建立高通量药物筛选体系,日均可检测 150 种化合物。筛选出的新型 t-PA 激活剂可使 ZYM-SVEC01 细胞的纤溶活性提升 2 倍,在动物模型中能显著溶解已形成的静脉血栓,为深静脉血栓治疗提供候选药物。
静脉毒性评价:用于评估药物对静脉内皮的损伤,某静脉注射hua疗药物在该模型中的半数毒性浓度(TC??)与猪体内静脉炎发生率的相关性达 88%,显著高于 PIEC 细胞系,为药物静脉毒性早期评价提供可靠工具。
基础培养方案
培养基:DMEM 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 维持在 7.2-7.4;为促进静脉表型维持,可添加 10ng/mL 血管内皮生长因子 C(VEGF-C),使 EphB4 表达量提升 35%。
传代流程:当细胞融合度达 70% 时,消化处理后按 1:5 比例接种,离心速度 800rpm,24 小时贴壁率超 95%,避免过度融合(>80% 会导致静脉特异性功能下降)。
冻存?;?/span>:采用含 10% DMSO 的wan全培养基,细胞密度 1.5×10?个 /mL,程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮,复苏时 37℃水浴 1 分钟,接种至预涂纤维连接蛋白的培养瓶,存活率可达 90%。
功能实验操作
静脉血管生成检测:细胞以 4×10?个 / 孔接种至 Matrigel 包被的 24 孔板,培养 48 小时后通过 ImageJ 软件定量分析管腔直径与分支数(静脉血管特征为大管腔、少分支),结果变异系数<10%。
抗凝功能检测:采用发色底物法测定细胞培养上清中 t-PA 活性,或通过凝xue酶原时间(PT)检测评估细胞表面抗凝物质的活性,与猪静脉组织的相关性达 85%。
优势:
静脉内皮特异性:是唯yi能稳定模拟猪静脉内皮功能的细胞系,静脉标志物表达与抗凝功能显著优于 PIEC 等动脉内皮细胞系,为静脉疾病研究提供专属模型。
疾病模型精准度高:在深静脉血栓等静脉疾病模拟中的生理相关性达 90%,远高于通用内皮细胞系,被国际静脉学会列为推荐模型。
与动脉细胞系互补:与 PIEC 细胞系形成血管研究的完整体系,可同时模拟动脉与静脉的差异功能,为血管系统整体研究提供便利。
局限性:
血管类型局限:源自肠系膜静脉,对大静脉(如下腔静脉)功能的模拟有限,需结合不同部位静脉细胞系使用。
传代稳定性较差:连续传代超过 80 代后静脉特异性标志物表达下降 15%,需严格控制传代次数以保持功能稳定。
培养成本较高:对纤维连接蛋白等细胞外基质依赖性强,培养成本是 PIEC 细胞的 1.3 倍,限制大规模应用。
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