大鼠E鈣黏蛋白上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒實驗說明書

　　以下是天津本生關(guān)于大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒的實驗說明書要點整理：

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法：用純化的大鼠E-Cad抗體包被微孔板，依次加入樣本抗原和HRP標(biāo)記的抗體，形成復(fù)合物后通過TMB顯色，顏色深淺與樣本中E-Cad濃度正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被抗體的96孔板

　　標(biāo)準(zhǔn)品(通常含400ng/ml凍干品，需用稀釋液重構(gòu))

　　生物素標(biāo)記檢測抗體、HRP標(biāo)記親和素

　　洗滌緩沖液(需蒸餾水稀釋)

　　TMB底物溶液及終止液

　　三、操作步驟

　　樣本準(zhǔn)備?

　　血清/血漿：離心去除顆粒，避免反復(fù)凍融。

　　組織勻漿：建議稀釋5,000倍后檢測。

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　按說明書梯度稀釋(如400→200→100→50→25→12.5→6.25 pg/ml)，空白孔用稀釋液作為0標(biāo)準(zhǔn)。

　　加樣與孵育?

　　每孔加50μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，再依次加入檢測抗體(100μL)，37℃孵育60分鐘。

　　洗板5次(手工洗板需拍干，避免交叉污染)。

　　顯色與終止?

　　每孔加底物A/B各50μL，避光反應(yīng)15分鐘。

　　加入終止液后15分鐘內(nèi)測450nm OD值。

　　四、注意事項

　　樣本處理?：溶血或脂血樣本需離心澄清;細菌污染可能導(dǎo)致假陽性。

　　實驗環(huán)境?：避免陽光直射，顯色后需避光。

　　質(zhì)量控制?：建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做復(fù)孔，計算平均值。

　　保存條件?：開封后未用完板條需密封干燥保存;試劑長期不用需-20℃存放。

　　五、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，用四參數(shù)擬合方程計算樣本濃度。

　　六、技術(shù)參數(shù)

　　檢測范圍?：通常為6.25-400 pg/ml(不同品牌可能有差異)。

　　靈敏度?：<15 pg/ml。

　　特異性?：不與大鼠其他蛋白交叉反應(yīng)。

　　注：以上資料僅供參考，如需完整說明書，建議聯(lián)系供應(yīng)商獲取隨貨文件。

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