饲料中的氯霉素的测定 - 气相色谱法

引言

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种广泛使用的广谱类

抗生素，由于它对人体具有严重的毒副作用 [1]

，医学界至

今还没有确定氯霉素的人体安全接触剂量。美国和欧盟都

禁止在食用性动物和动物饲料中使用氯霉素 [2]

，在法规中

CAP 的残留量为不得检出。

气相色谱的 ECD 检测器对于具有强电子亲和力的化合物有

较高的灵敏度，而本实验采用 Thermo Scientific Trace1310 气

相色谱，在分析饲料中的氯霉素时，简单、方便，重现性好。

仪器与试剂

Trace 1310气相色谱仪，配备了SSL（分流/不分流进样口），

ECD( 电子捕获检测器 )；

自动进样器：AS 1310

色谱工作站：Chromeleon 7.2

氯霉素标准品（99.5%）；衍生化试剂：三氟双（*基

硅烷基）乙酰胺（BSTFA）+ *基氯硅烷（TMCS）（99:1，

美国SUPELCO公司）C18固相萃取柱（美国SUPELCO公司），

填料 300mg；乙酸乙酯，正己烷，甲醇，乙腈均为色谱纯，

氯化钠为分析纯。

样品：购自山东猪饲料

实验方法

1. 标准溶液配制

电子天平准确称取 10.0mg 氯霉素标准品，色谱纯甲醇溶解

定容到 100ml，充分摇匀，配制成 100ug/ml 的标准溶液储

备液，置于 4℃冰箱中保存。制作工作曲线时，再取此储

备液用甲醇配制成其他浓度的标准溶液。

2. 样品预处理方法 [3]

：

2.1  提取

称取饲料 5.00g 左右，置于 50ml 塑料离心管内，加入 40ml

乙酸乙酯，盖好密封盖于涡旋混合器上混合 2min，超声

提取 20min。离心机上 4000r/min 离心分离 4min，取上清液

20.0ml，用氮气吹至近干，待净化。

2.2  液液萃取净化

称取 4.0g 氯化钠加水溶解定容到 100ml，配制 4% 的氯化

钠溶液。取 20ml 甲醇加 4% 的氯化钠溶液 80ml，配制成氯

化钠甲醇溶液。用氯化钠甲醇溶液 2ml 分三次溶解残渣，

均转移到一个 15ml 的具塞离心管中，加 4ml 正己烷，涡旋

混合2min。然后4000r/min离心4min，吸取上层正己烷弃去，

重复上述操作一次。水相加乙酸乙酯 3ml，混合 2min，

4000r/min 离心 4min，吸取上层乙酸乙酯，同样的步骤重复

两次。然后氮气吹干，用3ml5%的乙腈-水溶解，待柱净化。

2.3  固相萃取柱净化

准备好 C18 小柱，顺序用 5ml 甲醇，5ml 三氯甲烷，5ml 甲

醇和 5ml 水活化 C18 柱。将处理好的样品转移到柱上，用

5ml 水淋洗，然后用 6ml 乙腈洗脱，收集在离心管中，用

氮气吹干，待衍生化。

2.4  衍生化

向干的残留物中加入 100ul 衍生化试剂，盖塞并涡旋混

合 10s。在 65℃的水浴中反应 60min，然后用氮气吹除多

余的试剂。加入 0.25ml 正己烷，涡旋混合 10s，供色谱

分析使用。标准溶液，吹干后，采用同样的衍生化方法

处理。

3. 测定

3.1  色谱条件

分析结果与谱图

1. 气相色谱对氯霉素分析结果

采用 ECD 检测器对氯霉素衍生化样品进行分析，得到的谱

图如图 1 所示：

2. 工作曲线、回收率和精密度

配置浓度分别为 200,100,50,20,10,5ug/L 的标准样品，衍生化

后，用 ECD 模式下检测，得到的线性、检出限结果如表 2

所示

称取饲料样品，分别添加 2 个水平浓度的标准品，每个浓

度水平平行测定 5 次。结果表明，平均回收率为 80-85%，

相对标准偏差（RSD, n=5）为 1.4-5%?；厥章屎途芏仁?/span>

结果见表 3

3. 实际样品

称取 5.0g 购得的猪饲料中，平行检测两次，未检出氯霉素

残留。

结论

Thermo Scientific 的气相色谱 Trace 1310 分析饲料中的氯霉

素检测限可以达到 2ug/kg, 定量限达到 5ug/kg, 优于 GB/T 

8381.9-2005 中对于饲料中氯霉素 5ug/kg 的检测限要求。在

分析氯霉素质量浓度为5-200ug/kg时，线性良好，重现性.

瑞盛科技  许波