亚洲精品综合日韩中文字幕网站_精品综合久久久久97_中文在线天堂网www_久久精品免费一区二区三区_91久久国产综合精品女同国语_久久资源总站在线国产成人

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網>技術中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

IgG的簡易快速提取法(DEAE-纖維素直接提取法和DEAE-SephadexA-50提純法)

來源:南京龍葵生物科技有限公司   2010年07月07日 11:02  

應用硫酸銨鹽析及DEAE-纖維素層析法提純化的IgG,不僅操作復雜、需時較長,處理過程中樣品體積大大增加,而且透析時變性嚴重,容易引起抗體效價降低等。為了克服這一不足,特別是當大量提取IgG時,則往往采取下列的簡易辦法。

一、DEAE-纖維素直接提取法

取樣品直接過DEAE-纖維素柱。下面介紹的是zui為簡單的燒杯法。

1、以一定數(shù)量的DEAE52放入燒杯中,加入0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液,靜置30min,去上清細粒,再重復一次。

2、用布氏漏斗(內放兩層濾紙)過濾。

3、以5g濕重的DEAE-纖維素加1ml血清及3ml蒸餾水混合液的比例,加入各成分,充分攪拌。

4、于4℃中放置1h,中間攪拌數(shù)次。

5、用布氏漏斗抽濾,再用0.01Mol/L pH8.0PB緩沖液沖洗纖維素,抽濾。濾液即為提取的IgG液。

二、DEAE-SephadexA-50提純法

DEAE-SephadexA-50為弱堿性陰離子交換劑,經NaOH將Cl-型轉變?yōu)镺H-型后,可吸附酸性蛋白,血清中除γ-G屬中性蛋白外其余均屬酸性蛋白。當溶液的pH在6.5時,酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附,只有γ-G留在溶液中。因此利用這一原理可以提取 γ-G。這種提取法流程大大縮短,純化前后樣品體積變化不大,而且所得γ-G無變性現(xiàn)象。經過四次處理,其純度也較好。缺點是收集量少,損耗大。

1、DEAE—SephadexA—50的處理。取DEAE-SephadexA-50若干克,懸浮于蒸餾水中,1h后傾去上層小顆粒,然后用 0.50Mol/L NaOH處理1h,蒸餾水洗至中性,再用0.5 Mol/L HCl處理0.5h,水洗至中性,zui后以0.01Mol/L pH6.5PB液平衡、抽干。

2、取一定的血清量,加等量的0.01Mol/L pH6.5PB液,再加液體體積1/4的濾干的DEAE-SephadexA-50,混合、4℃放置1h,不時攪拌、抽濾、收集濾液。

3、再用同樣重量的DEAE-SephadexA-50處理濾液。反復處理三次。(全程共四次)。獲得濾液即為γ-G制品。

4、DEAE-SephadexA-50的回收。用0.5Mol/L的Na2HPO4洗脫,抽濾至濾液中無蛋白(OD280﹤0.04)后,再用蒸餾水洗至中性即可回收使用。

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
百色市| 芜湖市| 德格县| 扎囊县| 东明县| 商水县| 巨鹿县| 五峰| 福贡县| 青州市| 崇左市| 正宁县| 赤壁市| 汝城县| 河间市| 满城县| 涪陵区| 榆树市| 略阳县| 方山县| 光泽县| 思茅市| 南涧| 甘肃省| 广南县| 垣曲县| 临颍县| 东平县| 晋宁县| 宽甸| 汕头市| 博客| 达孜县| 永昌县| 肥西县| 隆尧县| 红桥区| 肇源县| 屏东县| 晋宁县| 龙口市|