牛伪狂犬病毒（PRV）定性检测试剂盒（ELISA）

使用说明书

【试剂盒名称】

牛伪狂犬病毒（PRV）定性检测试剂盒（ELISA）

【试剂盒用途】

定性检测牛血清、血浆及相关液体样本中伪狂犬病毒（PRV）。

   上海裕平生物科技公司高品质ELISA试剂盒供应商，品质，价格实惠，售后完善，并提供免费代检测服务。 

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将阴性对照、阳性对照、待测样本和酶标工作液加入到预先包被牛伪狂犬病毒（PRV）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入显色剂A、B液，显色剂（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中牛伪狂犬病毒（PRV）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据阴性对照、阳性对照和样品的OD值，判断样本中是否含有牛伪狂犬病毒（PRV）。

【试剂盒组成】

【需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

1. 标准规格酶标仪
2. 精密移液器及一次性吸头
3. 蒸馏水
4. 一次性试管
5. 吸水纸

【操作步骤】

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加对照品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置阳性对照孔、阴性对照孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在对照品孔中加入阳性对照品和阴性对照品各50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；每孔再加入酶标工作液100μL；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。

7、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

8、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

【样本要求】

1、样本不能含叠氮钠（NaN₃），因为叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

5、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

6、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

7、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

【结果判断】

1 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

【操作程序总结】

准备试剂，样品和对照品

加入准备好的样品、对照品品和酶标工作液，37℃反应60分钟

洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月

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