貝氏柯克斯體(俗稱Q熱立克次體)是常見的人畜共患病Q熱的病染原體。由于Q熱臨床表現(xiàn)多樣，臨床上常誤診為傷寒、上呼吸道感染、肺炎、肝炎等［1］，因而簡(jiǎn)便而實(shí)用的診斷和流行病學(xué)調(diào)查方法的建立，對(duì)Q熱病的診、防、治均有重要意義。我們建立的免疫金法檢測(cè)Q熱立克次體，初步證明快速而實(shí)用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。
一、材料與方法
1.Q熱立克次體株及對(duì)照菌株：Q熱立克次體七醫(yī)株(Ⅰ相和Ⅱ相)，李株(Ⅰ相)，YS-8株(Ⅰ相)，Henzerling株(Ⅰ相)和九里株(Ⅱ相)及普氏立克次體均為我室保存，嗜肺軍團(tuán)菌LP6，LP8抗原由大坪醫(yī)院檢驗(yàn)科惠贈(zèng)，綠膿假單胞菌PN103株，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌由本室保存。
2.鼠抗Q熱立克次體Ⅰ相單抗雜交瘤1B1D4D8(Ⅰ相elisa效價(jià)＞1∶12 800，Ⅱ相效價(jià)＜1∶3 200)由本室自制。按文獻(xiàn)［2］報(bào)道的方法標(biāo)記成10 nm的膠體金探針。
3.用兔抗Q熱立克次體免疫血清包被硝酸纖維素膜(NC膜孔徑0.45 μm)，參照文獻(xiàn)［2］介紹的方法建立Q熱立克次體的免疫金檢測(cè)法(DIGFA)。
4.用所建立的DIGFA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)感染豚鼠血、小鼠肝脾及蜱標(biāo)本中的Q熱立克次體。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的感染按我室常規(guī)進(jìn)行，其中豚鼠采集感染后6、11、16、30 d取血分離的白細(xì)胞16份；小鼠肝、脾標(biāo)本40份，采自20只昆明鼠受染后2、4、6、8、10、12、14、20、30 d，稱量后，用去離子水研磨成5%的懸液，1 000 g離心15 min，取上清液待檢；感染Q熱立克次體的非洲鈍緣蜱血淋巴和成蜱及其卵，下代幼蟲懸液標(biāo)本共8份。
二、結(jié)果
1.探針的特異性試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
表1 免疫金探針特異性試驗(yàn)結(jié)果
Q熱立克次體菌株結(jié)果對(duì)照菌株結(jié)果七醫(yī)株顆粒性抗原++++普氏立克次體-七醫(yī)株超聲粉碎抗原++++綠膿假單胞菌PN103-九里株++++嗜肺軍團(tuán)菌Lp6-李株+++嗜肺軍團(tuán)菌Lp8-Henzerling株++大腸埃希菌-Ys-8株+++金黃色葡萄球菌-七醫(yī)株Ⅱ相+/-陰性對(duì)照-
注：以Q熱立克次體七醫(yī)株檢測(cè)結(jié)果為++++，陰性對(duì)照為-度量各菌株試驗(yàn)結(jié)果 2.敏感性試驗(yàn)：取各種稀釋度的純凈顆粒性七醫(yī)株Ⅰ相抗原各50 μl點(diǎn)于同一硝酸纖維素膜中，制成13個(gè)斑點(diǎn)。用膠體金探針做檢測(cè)，經(jīng)3次重復(fù)均只有前4個(gè)斑點(diǎn)為陽性，即10-3，相當(dāng)于50 ng的Q熱立克次體抗原。
3.實(shí)驗(yàn)感染標(biāo)本檢測(cè)：豚鼠感染立克次體后，不同時(shí)間內(nèi)采血，用DIGFA檢測(cè)結(jié)果：小鼠感染后2 d即可用DIGFA檢測(cè)到肝、脾中立克次體抗原，6 d陽性zui強(qiáng)，8 d減弱，12 d后檢測(cè)為陰性，該結(jié)果與感染后小鼠脾印片經(jīng)常規(guī)姬姆薩染色所見的立克次體消長(zhǎng)相吻合。對(duì)照小鼠標(biāo)本檢測(cè)均陰性。受染蜱血淋巴和成蜱懸液經(jīng)檢測(cè)為陽性，而其卵、下代幼蟲及正常蜱標(biāo)本均為陰性。
三、討論
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和核酸探針檢測(cè)立克次體，特異性和敏感性均很好［3］，但難以推廣。我們將多個(gè)標(biāo)本點(diǎn)于同一張NC膜上進(jìn)行批量標(biāo)本的DIGFA檢測(cè)，且直接檢測(cè)顆粒性Q熱立克次體抗原(目前文獻(xiàn)報(bào)道的多是檢測(cè)抗體，如登革熱病毒抗體［4］，流行性出血熱病毒抗體［5］等)，有很好的特異性。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明，該法至少可檢出50 ng的Q熱立克次體抗原。
DIGFA檢測(cè)豚鼠血液中Q熱立克次體的方法，可能進(jìn)一步應(yīng)用于Q熱病人的快速診斷。用DIGFA檢測(cè)受染小鼠脾臟的結(jié)果與常規(guī)姬姆薩染色所見的Q熱立克次體在脾臟中的消長(zhǎng)相吻合，故可望應(yīng)用于Q熱自然疫源地調(diào)查中野外嚙齒動(dòng)物臟器的檢查。
參考文獻(xiàn)
1 俞樹榮.編著.Q熱的病原與防治.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社, 1990.42-45.
2 Hayat MA. Collidal gold-principales, methods and applications. San Diego: Acad Press, 1989, 23-39.
3 余全，俞樹榮.用DNA探針技術(shù)檢出Q熱立克次體.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，1994，14：349-351.
4 姚*. 斑點(diǎn)免疫金滲濾法檢測(cè)血清中抗登革熱病毒IgM抗體的研究. 陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn), 1997, 12: 18-19.
5 趙中夫, 郭進(jìn)軍, 閻小君. 滴金免疫法快速檢測(cè)腎綜合征出血熱血清特異性IgM的研究. 中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志, 1998, 21: 96-98.