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士瑞化工克隆/建庫(kù)/表達(dá)超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞

來(lái)源:上海士瑞化工實(shí)業(yè)有限公司   2013年09月27日 07:30  

--克隆大DNA:包括表達(dá)質(zhì)粒,基因組DNA克隆
--構(gòu)建質(zhì)粒文庫(kù):減少DNA大小偏倚性,使全長(zhǎng)cDNA克隆、雙雜交質(zhì)粒等各種大小的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率更接近,提高文庫(kù)代表性(比DH10B高25倍)。

Hte 基因型
Hte(轉(zhuǎn)化)基因型是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高大質(zhì)粒、連接DNA的宿主菌基因型,并使細(xì)胞生長(zhǎng)加快(當(dāng)天獲得菌落),已經(jīng)成功應(yīng)用于25kb超螺旋DNA和8kb連接DNA的克隆。XL10-Gold®,BL21-Gold,BL21-CodonPlus®,SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列細(xì)胞都帶有這個(gè)新的性狀。

超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞
Stratagene提供多種>5 x 109 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA轉(zhuǎn)化效率的化學(xué)法超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞正是克隆獲得大質(zhì)粒、連接DNA克隆和建庫(kù)時(shí)zui值得推薦的。

電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
Stratagene的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞特別耐受電擊處理,方便好用,在DNA材料極珍貴、量少時(shí),或構(gòu)建有代表性文庫(kù)時(shí),建議采用電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。ElectroTen-Blue®細(xì)胞是目前商品化的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞中效率zui高的,達(dá)到>3 x 1010 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE® 和TG1等細(xì) 胞也提供電轉(zhuǎn)化形式感受態(tài)細(xì)胞。

SURE®-克隆不穩(wěn)定DNA
大腸桿菌DNA修復(fù)系統(tǒng)會(huì)針對(duì)重復(fù)序列、二級(jí)結(jié)構(gòu)(如Z-DNA)等真核DNA進(jìn)行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細(xì)胞針對(duì)uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進(jìn)行突變,提高了真核來(lái)源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達(dá)20倍以上,并且適合克隆甲基化DNA。提供化學(xué)和電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,效率分別達(dá)1x1010 和1x109。

ABLE®-克隆毒性DNA
目的DNA的蛋白產(chǎn)物常常對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,通常的解決辦法是采用低拷貝質(zhì)粒,或者采用極為嚴(yán)緊的表達(dá)調(diào)控。為了獲得穩(wěn)定的克隆,ABLE細(xì)胞減少ColE來(lái)源質(zhì)粒的拷貝數(shù)(如pUC、pBluescript系列載體),以達(dá)到保持相對(duì)較高拷貝數(shù)的同時(shí)使本底表達(dá)對(duì)于細(xì)胞的毒性降至zui低的效果。

MR系列®-克隆甲基化DNA
真核基因組DNA常常因高度甲基化而被大腸桿菌修飾系統(tǒng)切割、刪除,在構(gòu)建文庫(kù)時(shí),由于要對(duì)cDNA進(jìn)行甲基化保護(hù),某些cDNA克隆也較難完成。采用Stratagene的MR (Minus Restriction)突變刪除了修飾系統(tǒng)的感受態(tài)細(xì)胞,可以構(gòu)建質(zhì)量非常高的cDNA和基因組文庫(kù)。這些細(xì)胞包括:用于大質(zhì)??寺〉腦L10-Gold®超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞,克隆連接DNA、轉(zhuǎn)化效率 目前zui高的ElectroTen-Blue®電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,單次反應(yīng)包裝的SoloPack® Gold,以及XL2-Blue MRF´ ,XL1-Blue MRF´ Kan(四環(huán)素抗性質(zhì)粒),XL1-Blue MR(沒(méi)有F´附加體),克隆有二級(jí)結(jié)構(gòu)的SURE細(xì)胞等。

 

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