手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
兔IgG定量EIA试剂盒使用说明
原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗兔IgG单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IgG与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，IgG浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IgG浓度。
试剂盒组成（2-8℃保存）
| 酶标板（Coated Wells） | 96孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×标本稀释液（Sample Buffer） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml |
| 标准品（Standards）：3200ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| 封板纸 | 一张 | 终止液（Stop Solution） | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、尿液等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。尿液测定前用标本稀释液作1：100稀释（取10ul，加标本稀释液990ul,稀释100倍）。血清或血浆至少1：10-50万倍稀释。
2. 标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成6400ng/ml的溶液。设标准管8管，*管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在*管中加入6400ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。。
3. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃60分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
6. 每孔加入100ul终止液混匀。
7. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品640、320、160、80、40、20、10、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应IgG含量，再乘上稀释倍数即可。
试剂盒性能
1. 灵敏度：zui小的IgG 检测浓度小于6ng/ml。
2. 特异性：可同时检测重组或天然的兔IgG。不与兔其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心