手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
在蛋白质研究领域，Western Blot（蛋白质免疫印迹）与免疫沉淀（IP）实验是探究蛋白质表达、修饰、相互作用等关键信息的核心技术。而 Western 及 IP 裂解液作为样本处理的起始环节，其性能对实验结果的准确性与可靠性起着决定性作用。优质的裂解液不仅需要高效裂解细胞或组织，释放完整蛋白质，还需维持蛋白质的天然特性，确保后续实验顺利进行。
一、核心技术原理
（一）细胞裂解机制
Western 及 IP 裂解液通过多种成分协同作用实现细胞裂解。表面活性剂是其中的关键成分，常见的有 SDS（十二烷基硫酸钠）、Triton X - 100、NP - 40 等。SDS 作为强离子型表面活性剂，能够破坏细胞膜的脂质双分子层结构，同时与蛋白质分子结合，使蛋白质变性并解聚为亚基，有效释放细胞内蛋白质。Triton X - 100 和 NP - 40 则属于温和的非离子型表面活性剂，它们在裂解细胞的同时，可部分保留蛋白质的天然构象，适用于 IP 实验中对蛋白质相互作用研究，避免因过度变性导致蛋白质结合位点被破坏。
此外，裂解液中的盐离子（如 NaCl）可调节溶液的离子强度，维持蛋白质的溶解性；缓冲体系（如 Tris - HCl）则保持溶液 pH 稳定，防止蛋白质在 pH 条件下发生不可逆变性。例如，在 pH 7.4 - 7.6 的 Tris - HCl 缓冲环境中，多数蛋白质能够保持稳定的结构与活性。
（二）蛋白质?；せ?/span>
为确保裂解后的蛋白质不被降解或修饰，裂解液中通常添加多种蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。蛋白酶抑制剂包括 PMSF（）、AEBSF、EDTA 等，它们通过与蛋白酶活性中心的丝氨酸残基结合，不可逆地抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶、糜蛋白酶）的活性；同时，EDTA 等金属离子螯合剂可抑制金属蛋白酶的活性。磷酸酶抑制剂如 β - 甘油磷酸钠、氟化钠等，能够特异性抑制蛋白磷酸酶，防止磷酸化蛋白质发生去磷酸化，保留蛋白质的磷酸化修饰信息，这对于研究蛋白质磷酸化调控机制的 Western Blot 和 IP 实验至关重要。
二、产品特性与优势
（一）高效裂解，确保蛋白质充分释放
优质的 Western 及 IP 裂解液能够快速且地裂解细胞或组织样本。以哺乳动物细胞为例，在室温条件下，加入裂解液后，通过简单的涡旋振荡或超声处理，5 - 10 分钟内即可完成细胞裂解，释放细胞内 90% 以上的蛋白质。对于组织样本，由于其结构更为复杂，裂解液中的成分能够渗透到组织间隙，配合机械匀浆等处理方式，有效破坏细胞间连接和细胞结构，实现蛋白质的高效释放。
（二）特异性保留目标蛋白质特性
针对不同实验需求，裂解液的配方经过优化设计。用于 Western Blot 的裂解液在保证蛋白质充分释放的同时，可使蛋白质变性，便于后续 SDS - PAGE 电泳根据分子量大小进行分离；而 IP 裂解液采用温和裂解体系，最大限度保留蛋白质的天然构象和相互作用位点，确?？固迥芄惶匾煨允侗鸩⒔岷夏勘甑鞍字?，成功捕获与其相互作用的蛋白质复合物，为研究蛋白质 - 蛋白质相互作用提供可靠样本。
（三）兼容性强，适配多种样本类型
Western 及 IP 裂解液适用于多种生物样本，包括哺乳动物细胞、植物细胞、细菌、酵母等。针对不同样本的特性，裂解液中的成分比例进行相应调整。例如，植物细胞含有细胞壁，裂解液中会添加纤维素酶、果胶酶等成分，帮助破坏细胞壁结构；细菌样本则可能需要更高浓度的表面活性剂来突破细胞膜和细胞壁的双重屏障，确保蛋白质释放。同时，该裂解液与后续实验中的各种试剂（如电泳缓冲液、抗体等）具有良好的兼容性，不会对实验结果产生干扰。
（四）标准化生产，保障实验结果重复性
专业的 Western 及 IP 裂解液采用标准化生产流程，严格控制原材料质量和生产工艺。从关键成分的筛选、配比，到最终产品的分装、质检，每个环节都遵循严格的质量标准。例如，对蛋白酶抑制剂的活性、表面活性剂的纯度等指标进行精确检测，确保每批次产品的性能稳定一致。这使得不同实验室、不同实验人员使用同一品牌裂解液进行实验时，能够获得相似的实验结果，有效提高实验的重复性和可靠性。
三、实验操作流程与注意事项
（一）实验操作流程
样本准备：收集细胞或组织样本，对于细胞样本，需用 PBS 缓冲液清洗去除培养基残留；组织样本则需在预冷的生理盐水中清洗，去除血液等杂质。
裂解液添加：按照样本类型和数量，加入适量裂解液。一般而言，每 1×10?个细胞加入 100 - 200 μL 裂解液；每 100 mg 组织样本加入 500 - 1000 μL 裂解液。
裂解处理：细胞样本可通过涡旋振荡 1 - 2 分钟，或在冰上超声处理（30 秒超声，间隔 30 秒，重复 3 - 5 次）实现裂解；组织样本则需先进行机械匀浆，再结合超声处理，确保裂解充分。
离心取上清：将裂解后的样本在 4℃条件下，12000 - 15000 rpm 离心 10 - 15 分钟，取上清液，即为含有蛋白质的裂解产物，可用于后续 Western Blot 或 IP 实验。
（二）注意事项
裂解液保存：裂解液应在低温条件下（-20℃）保存，避免反复冻融，以防止蛋白酶抑制剂和其他成分失活。
样本处理温度：整个样本裂解过程应在冰上或 4℃环境中进行，降低蛋白酶活性，减少蛋白质降解。
抑制剂添加：部分裂解液中的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂为干粉形式，需在使用前现配现加，确保其活性；同时，注意添加顺序，避免抑制剂之间发生相互作用。
避免过度裂解：对于 IP 实验，过度裂解可能导致蛋白质复合物解离，影响免疫沉淀效果，需根据样本特性优化裂解时间和强度。
Western 及 IP 裂解液作为蛋白质研究的重要工具，其先进的技术原理和优良的产品特性为 Western Blot 和免疫沉淀实验奠定了坚实基础。通过合理选择和正确使用裂解液，科研人员能够获取高质量的蛋白质样本，为深入探究蛋白质的功能与机制提供可靠保障，推动生命科学研究不断向前发展。
关键词：Western Blot；免疫沉淀；裂解液；蛋白质研究；样本处理
相关产品
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心