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裂解与?；こ煞?/span>：除异硫氰酸胍外，部分总 RNA 提取试剂还包含 β - 巯基乙醇，其作为强还原剂，能进一步破坏 RNase 中的二硫键，协同增强对 RNase 的抑制效果，确保 RNA 在提取过程中不被降解 。此外，试剂中的缓冲体系（如 Tris - HCl）维持提取过程中的 pH 稳定，通常将 pH 控制在酸性范围（约 pH 4.5 - 5.5），此环境下 DNA 更易分配至有机相，有助于 RNA 与 DNA 的有效分离。
纯化辅助成分：异丙醇常用于沉淀水相中的 RNA。在加入异丙醇后，RNA 分子因溶解度降低而析出，通过离心可形成 RNA 沉淀，便于后续收集 。75% 乙醇则用于洗涤 RNA 沉淀，去除残留的盐离子和有机试剂，减少杂质对 RNA 质量的影响，获得纯度较高的总 RNA。
动物组织样本：取适量新鲜或液氮冻存的动物组织（如 50 - 100 mg），置于预冷的研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末状。将研磨后的组织粉末转移至含有适量总 RNA 提取试剂的离心管中，剧烈振荡 15 - 30 秒，使组织与试剂充分混合，室温静置 5 分钟，确保细胞充分裂解 。加入氯仿后，振荡混匀，室温离心（12000 rpm，15 分钟），此时溶液分为三层，RNA 位于上层水相。小心吸取水相至新的离心管，加入异丙醇沉淀 RNA，再次离心收集 RNA 沉淀，用 75% 乙醇洗涤后晾干，最后用适量 RNase - free 水溶解 RNA。
植物组织样本：由于植物细胞具有细胞壁，可先将植物组织（如叶片、幼芽）在液氮中研磨成细粉，后续操作与动物组织类似 。但部分植物组织富含多糖、多酚等次生代谢物，可能干扰 RNA 提取?？稍谔崛」讨屑尤?PVP（聚乙烯吡咯烷酮）等吸附剂，或通过高盐低 pH 值缓冲液洗涤等方法去除杂质，提高 RNA 纯度。
细胞样本：对于贴壁细胞，吸去培养基后，直接在培养板中加入适量总 RNA 提取试剂，用枪头反复吹打使细胞裂解，将裂解液转移至离心管；悬浮细胞则先离心收集细胞，再加入试剂裂解 。后续步骤与组织样本提取相同，通过氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤获得 RNA 样本。
试剂储存与使用规范：严格按照产品说明书储存总 RNA 提取试剂，避免高温、光照和反复冻融，防止试剂成分失效 。使用前将试剂平衡至室温，操作过程中佩戴手套、口罩，使用 RNase - free 的耗材，避免外源 RNase 污染样本，影响 RNA 质量 。
样本处理细节：确保样本新鲜，避免长时间放置导致 RNA 降解。对于冻存样本，需在液氮或干冰条件下运输和保存 。在研磨组织样本时，要迅速充分，防止样本融化；细胞裂解过程中，保证细胞裂解，可适当延长振荡或吹打时间 。
优化实验条件：不同生物样本的成分和结构存在差异，可通过预实验优化试剂用量、裂解时间、离心条件等参数 。对于 RNA 含量较低或杂质较多的样本，可增加样本起始量或采用多次洗涤、纯化步骤，提高 RNA 提取质量。
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